"RenCa epithelioid cells小鼠腎癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。 BJA-B-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GES1細(xì)胞、OVCAR-10細(xì)胞、SLMT-1細(xì)胞 Granta 519細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HET-1A細(xì)胞、J 774A.1細(xì)胞、Central Adrenergic TH-expressing a細(xì)胞 H-510A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUT28細(xì)胞、Line 207細(xì)胞、McCoy細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 RenCa epithelioid cells小鼠腎癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時(shí)候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時(shí)候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時(shí)沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 HCET細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H295R細(xì)胞、FM88細(xì)胞、EA.hy 926細(xì)胞 CEM clone 7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKM-1細(xì)胞、BTI-TN5B1-4細(xì)胞、SW-620細(xì)胞 Fu97細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KRC/Y細(xì)胞、T 84細(xì)胞、LN 229細(xì)胞 OCI Ly19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-3255細(xì)胞、M-20細(xì)胞、HCC70細(xì)胞 KRC Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L540細(xì)胞、B-95-8細(xì)胞、McG-1細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 RenCa epithelioid cells小鼠腎癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 COR-L23/P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RKO-E6細(xì)胞、AtT 20細(xì)胞、NALM-6細(xì)胞 WEHI-279細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31FUJ細(xì)胞、LICCF細(xì)胞、PC14細(xì)胞 Granta 519細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HET-1A細(xì)胞、J 774A.1細(xì)胞、Central Adrenergic TH-expressing a細(xì)胞 COR-L51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C26細(xì)胞、MC/9細(xì)胞、LM8細(xì)胞 NUGC4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCEpiC細(xì)胞、IGROV-1細(xì)胞、TGW-nu-1細(xì)胞 C28/I2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO/dhFr-細(xì)胞、Hos TE-85細(xì)胞、526 mel細(xì)胞 32D/cl3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4-II-E-C3細(xì)胞、Hs746-T細(xì)胞、EM-3細(xì)胞 U-87MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D341Med細(xì)胞、B16/BL6細(xì)胞、TT細(xì)胞 RMS1598細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1355細(xì)胞、T2細(xì)胞、Ramos 1細(xì)胞 IMR 32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RenCa細(xì)胞、MDA-MB-134 VI細(xì)胞、H1048細(xì)胞 RenCa epithelioid cells小鼠腎癌細(xì)胞系 CL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEL 7404細(xì)胞、HEL-92細(xì)胞、MiaPaCa-2細(xì)胞 IOSE 80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2330細(xì)胞、NALM-6細(xì)胞、FHC細(xì)胞 Fetal Rhesus Kidney-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IGR-OV1細(xì)胞、HOS TE85細(xì)胞、LAN-6細(xì)胞 APRE-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuTu-80細(xì)胞、RAW2647細(xì)胞、OCI-LY-1細(xì)胞 SW-1088細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEMO-1細(xì)胞、C17細(xì)胞、PL45細(xì)胞 Cates 1B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP2細(xì)胞、67NR細(xì)胞、A549細(xì)胞 K7M2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03569D細(xì)胞、Pro-Lec1.3C細(xì)胞、NCI-H1092細(xì)胞 HBZY-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML-3細(xì)胞、HSC1細(xì)胞、P-388細(xì)胞 MEG-01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H165細(xì)胞、CAL 33細(xì)胞、LOU-NH91細(xì)胞 IOSE80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H69C細(xì)胞、Jurkat E6-1細(xì)胞、MGECs細(xì)胞 Murine Long bone Osteocyte-Y4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC VII細(xì)胞、OCI/AML5細(xì)胞、MONO-MAC 6細(xì)胞 P3JHR1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEMC7細(xì)胞、ECC-10細(xì)胞、JB6Cl30細(xì)胞 MES-SA Dx5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs294細(xì)胞、HSC6細(xì)胞、C-33 A細(xì)胞 JeKo-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM2細(xì)胞、BCP-1細(xì)胞、H1734細(xì)胞 NCI-H510A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:G-292 clone A141B1細(xì)胞、H209細(xì)胞、CL1.0細(xì)胞 MC3T3-E1(C4)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHCRC subclone 11細(xì)胞、PC 61.5.3細(xì)胞、P388D1細(xì)胞 Nb2-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2444細(xì)胞、L-363細(xì)胞、MFE 280細(xì)胞 COLO-320-HSR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA 433細(xì)胞、TERT-RPE1細(xì)胞、RPTEC/TERT1細(xì)胞 alphaTC clone 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L細(xì)胞、PK(15)細(xì)胞、Hs 683.T細(xì)胞 MMAc.SF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PIEC細(xì)胞、NCIH2452細(xì)胞、CDC/EU.HMEC-1細(xì)胞 HS852.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL-299細(xì)胞、NCIH1915細(xì)胞、Fetal Rhesus Kidney-4細(xì)胞 B16 BL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KOSC2細(xì)胞、HeLa/S3細(xì)胞、Jurkat-77細(xì)胞 SU86_86細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL-I細(xì)胞、Melan-a細(xì)胞、L-Wnt3A細(xì)胞 PF382細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL-5 Cl 2細(xì)胞、RWPE1細(xì)胞、PC 61 5.3細(xì)胞 Hs 737.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 F細(xì)胞、BT細(xì)胞、Merwin Plasma Cell tumor-11細(xì)胞 hTERT RPE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-8226細(xì)胞、MHCC97-H細(xì)胞、H-2108細(xì)胞 H524細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MN-60細(xì)胞、H1781細(xì)胞、GM3569細(xì)胞 Tu-177細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUG-Chor1細(xì)胞、NIH:OVCAR-10細(xì)胞、WM2664細(xì)胞 SKMEL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca-83細(xì)胞、SW1353細(xì)胞、GM04679細(xì)胞 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13細(xì)胞、VeroC1008細(xì)胞 "
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