"MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞系由CailleauR在1976年從一名48歲的患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的白人女性的心包滲出液中分離建立的。該細(xì)胞表達(dá)FGF的受體。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問(wèn)題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書(shū)上也不講這個(gè)問(wèn)題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話(huà),這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見(jiàn)得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 Hs 822.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-MC細(xì)胞、CV 1細(xì)胞、GCT0404細(xì)胞 HDQ-P1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT.116細(xì)胞、A-673細(xì)胞、HIEC細(xì)胞 HUT 28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1666細(xì)胞、SNU-475細(xì)胞、MEG-01細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長(zhǎng),用胰酶消化的時(shí)候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來(lái),很難把它們吹散成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞。而且長(zhǎng)得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長(zhǎng)得滿(mǎn)滿(mǎn)的了。想請(qǐng)教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來(lái)也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒(méi)有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動(dòng)培養(yǎng)皿的時(shí)候盡量動(dòng)作輕,避免晃動(dòng)。細(xì)胞生長(zhǎng)挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問(wèn)題我覺(jué)得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng):二、細(xì)胞細(xì)化太過(guò),細(xì)胞成片脫落,吹打時(shí)沒(méi)有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長(zhǎng)。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來(lái)的細(xì)胞放在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng),一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:4傳代;2-3天換液1次 no-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MiaPaca.2細(xì)胞、KMB-17細(xì)胞、HRIF細(xì)胞 MD Anderson-Metastatic Breast-231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:95D細(xì)胞、Hs 940.T細(xì)胞、UACC812細(xì)胞 NCIH847細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPM2細(xì)胞、Pa16C細(xì)胞、H23細(xì)胞 BpRcl細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTR-8/SV neo細(xì)胞、NCI-H508細(xì)胞、ARH 77細(xì)胞 A549/ATCC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU-4475細(xì)胞、ReNcell CX細(xì)胞、CCD-841CoTr細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣;多角形 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié):1)一般客戶(hù)拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶(hù)收到細(xì)胞后先不開(kāi)蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟龋绻麣鉁氐陀冢炊鹊?,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi)?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 CAL-51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI 164細(xì)胞、HMVEC細(xì)胞、MC3T3細(xì)胞 EFM-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMES細(xì)胞、RD-ES細(xì)胞、HT-115細(xì)胞 Colon-26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN 382細(xì)胞、PM6細(xì)胞、COLO 357細(xì)胞 COLO679細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EPC細(xì)胞、Hs-940細(xì)胞、SCH細(xì)胞 HCS2/8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUSM-1細(xì)胞、CHP126細(xì)胞、H-2227細(xì)胞 HBEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RWPE-2細(xì)胞、SKO3細(xì)胞、GM03571細(xì)胞 NIH:OVCAR-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63-Ag8.653細(xì)胞、QBI-HEK 293A細(xì)胞、IEC-6細(xì)胞 Kupffer細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-729-T細(xì)胞、HN 4細(xì)胞、SUM 190PT細(xì)胞 NCI-H78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK LU 1細(xì)胞、PK-136細(xì)胞、HEL-1細(xì)胞 BC-PAP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NMCG-1細(xì)胞、QG56細(xì)胞、WM 239A細(xì)胞 MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 Mahlavu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp2/0-Ag14細(xì)胞、MB468細(xì)胞、HO-1-N-1細(xì)胞 TC-1 [Mouse lung]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 274細(xì)胞、HuH-28細(xì)胞、NCIH2023細(xì)胞 NALM-6-M1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-15細(xì)胞、KRCY細(xì)胞、LAD 2細(xì)胞 OVCAR420細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SiHa細(xì)胞、MDA MB 134VI細(xì)胞、SF767細(xì)胞 SW260細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-10細(xì)胞、PLMVEC細(xì)胞、PG-4(S+L-)細(xì)胞 KTA-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3-Ag 1.2.3細(xì)胞、Colon-38細(xì)胞、HOS細(xì)胞 KTA-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3-Ag 1.2.3細(xì)胞、Colon-38細(xì)胞、HOS細(xì)胞 HL-7702細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly3細(xì)胞、H508細(xì)胞、BPH1細(xì)胞 PLB-985細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H676細(xì)胞、CAL 12細(xì)胞、KMH2細(xì)胞 HEK;293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1954 BL細(xì)胞、B16/F1細(xì)胞、PaTu 8988 S細(xì)胞 MLO-Y4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HELF細(xì)胞、Hs 832(C).T細(xì)胞、Jiyoye (P-2003)細(xì)胞 WERI-Rb-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDLM-2細(xì)胞、RT112細(xì)胞、UM-UC-1細(xì)胞 KYSE 30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3HR1細(xì)胞、EA.Hy926細(xì)胞、PCI-04B細(xì)胞 WEHI 164細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFLS-OA細(xì)胞、H-250細(xì)胞、Neuro-2a細(xì)胞 Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIM 1215細(xì)胞、HMC-1細(xì)胞、HuH28細(xì)胞 Adeno-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRC-LCD細(xì)胞、TSCC1細(xì)胞、8402細(xì)胞 J774.A1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS114細(xì)胞、UMR 106細(xì)胞、RGC-6細(xì)胞 HEK293A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK62a細(xì)胞、Panc 4.03細(xì)胞、L-540細(xì)胞 NS1-Ag4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2196細(xì)胞、OCI-Ly 3細(xì)胞、SW-626細(xì)胞 QGP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H220細(xì)胞、MT-2J細(xì)胞、LS-180細(xì)胞 KAT5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTori-3.1細(xì)胞、MHH-CALL2細(xì)胞、H-1404細(xì)胞 H-1915細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S180細(xì)胞、NPC-TW039細(xì)胞、Pt-K2細(xì)胞 aTC1-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM115mel細(xì)胞、P31FUJ細(xì)胞、RCC-4細(xì)胞 EL 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L5178Y細(xì)胞、Hs 294T細(xì)胞、HuH-28細(xì)胞 GM15452細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 343.T細(xì)胞、Human Hepatocyte Line 5細(xì)胞、COLO 320細(xì)胞 2780細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:aTC1 Clone 6細(xì)胞、T-47D細(xì)胞、HCC-1428細(xì)胞 OVCA8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03320細(xì)胞、RCC-10細(xì)胞、hA549細(xì)胞 CAOV4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:G-292, clone A141B1細(xì)胞、Hs 766細(xì)胞、Panc08.13細(xì)胞 NTera-2D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuH7細(xì)胞、NALM-6-M1細(xì)胞、TKB1細(xì)胞 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