"J82 epithelioid cells人膀胱移行癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:電子顯微鏡下未觀察到橋粒但觀察到數(shù)目不同的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和突出微絲。 含ras (H-ras)癌基因。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁消化難題:1,先用PBS 把細(xì)胞洗兩遍,使瓶內(nèi)沒有血清了,減少對胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在細(xì)胞有些消化下來時,拿著瓶口,運(yùn)用手腕的力量輕輕震蕩瓶內(nèi)液體,這樣細(xì)胞很快就下來了,還不需要吹打,分散也均勻;2,成團(tuán)、絮狀:消化液里加入edta可以減少細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象,血清可以終止胰酶的作用,如果是進(jìn)口血清的話也能終止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清終止,如果消化液中加入了edta的話,就要將消化液倒干凈,如果細(xì)胞貼壁要求不是很嚴(yán)格的話,一般不需要進(jìn)行離心。鼻咽癌細(xì)胞的貼壁能力很強(qiáng),用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養(yǎng)基,加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細(xì)胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性最強(qiáng))至細(xì)胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細(xì)胞脫落(有流下來的趨勢),隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細(xì)胞很多且需要大量細(xì)胞實(shí)驗(yàn),則不能棄去胰酶),加入培養(yǎng)基仔細(xì)吹打(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代,否則細(xì)胞聚集成團(tuán)塊或絮狀)。一般我都離心一次棄去上清(去除殘留的胰酶及漂浮的死細(xì)胞或細(xì)胞碎片);消化過度:馬上用培養(yǎng)基中和,用吸管吹打細(xì)胞,收集全部的細(xì)胞到以無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清,用全培重懸,換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),狀態(tài)不好的細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中會死亡脫落,在換液的時候可以清除掉! T9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA801D細(xì)胞、CWR22-R1細(xì)胞、NCIH250細(xì)胞 H295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mia PACA 2細(xì)胞、MM134細(xì)胞、H660細(xì)胞 Adeno-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRC-LCD細(xì)胞、TSCC1細(xì)胞、8402細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 J82 epithelioid cells人膀胱移行癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 L363細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha-TC1-6細(xì)胞、H1568細(xì)胞、S180細(xì)胞 Hs683T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1836細(xì)胞、PBL細(xì)胞、HTori3細(xì)胞 H1755細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_04_03細(xì)胞、ME180細(xì)胞、MDAPCa-2b細(xì)胞 GM03320D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK.10細(xì)胞、HLEB3細(xì)胞、RH35細(xì)胞 MDCK Type II細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LMH細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-12F細(xì)胞、HEC-1A細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 J82 epithelioid cells人膀胱移行癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng):1)如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細(xì)胞即時離心,加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會跟進(jìn)解決;2)貼壁細(xì)胞生長緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(最高不能超過20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);3)生長不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 3T6-Swiss albino細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-9/S1細(xì)胞、STC-1細(xì)胞、G361細(xì)胞 H-510細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-2 ad細(xì)胞、FHL124細(xì)胞、SK-BR3細(xì)胞 Sci-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Anip-973細(xì)胞、EC-9706細(xì)胞、ECC 10細(xì)胞 LLC-PK(1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Murine Leydig Tumor Cell line-1細(xì)胞、mRTEC細(xì)胞、HLMVEC細(xì)胞 DSL-6A-C1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTh 74細(xì)胞、SW-1271細(xì)胞、HMEC細(xì)胞 WM266mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hepatoma-22細(xì)胞、HEK-293細(xì)胞、CEMC1細(xì)胞 Molm 14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-O7e細(xì)胞、HCO細(xì)胞、38C-13細(xì)胞 PLB 985細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHI1細(xì)胞、OEC33細(xì)胞、FRH-0201細(xì)胞 A 172細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A427細(xì)胞、BEAS2B細(xì)胞、Tissue Culture-1細(xì)胞 IPLB-SF-21-AE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL24細(xì)胞、SCC154細(xì)胞、JC細(xì)胞 J82 epithelioid cells人膀胱移行癌細(xì)胞系 PC3M-IE8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NWA細(xì)胞、SW-1417細(xì)胞、X63.Ag8.653細(xì)胞 NCI-H1770細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKGIIIA細(xì)胞、HuH28細(xì)胞、TK.10細(xì)胞 LUDLU 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC9204細(xì)胞、CCD841CoTr細(xì)胞、NPC-TW-039細(xì)胞 COLO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 766T細(xì)胞、OACP4 C細(xì)胞、Hs-675-T細(xì)胞 H1437細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C918細(xì)胞、THP1細(xì)胞、HGC27細(xì)胞 L5178-R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Karpas-299細(xì)胞、GM3190細(xì)胞、P3X63-Ag8.653細(xì)胞 L5178-R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Karpas-299細(xì)胞、GM3190細(xì)胞、P3X63-Ag8.653細(xì)胞 Chinese Hamster Ovary細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs934T細(xì)胞、SKBR-3細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞 OCILY10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLF-a細(xì)胞、RSMC細(xì)胞、C3H10T1/2 clone8細(xì)胞 MDA231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JURKAT E-61細(xì)胞、Panc813細(xì)胞、KU-812細(xì)胞 GA-10-Clone-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGH-U3細(xì)胞、NCIH2135細(xì)胞、SKLMS-1細(xì)胞 Laboratory of Allergic Diseases 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-1細(xì)胞、Hep 3B2_1-7細(xì)胞、GM-215細(xì)胞 RCC_7860細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-2 OS細(xì)胞、IOSE80UBC細(xì)胞、OLN93細(xì)胞 ECC-12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC10細(xì)胞、SCL1細(xì)胞、Lec1細(xì)胞 LM TK negative細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1088細(xì)胞、P3J細(xì)胞、HR1K細(xì)胞 CW2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Epstein-Barr-2細(xì)胞、MJ細(xì)胞、HS 683T細(xì)胞 HeLaS3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP-N-RT-BM細(xì)胞、HCC0202細(xì)胞、AC29細(xì)胞 CCRFCEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MM-1S細(xì)胞、SR786細(xì)胞、HTori:3細(xì)胞 CCD841CoTr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-72細(xì)胞、MFM223細(xì)胞、U-343細(xì)胞 HOMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MES細(xì)胞、KYSE-510細(xì)胞、BEL 7404細(xì)胞 HCC1428細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P-388細(xì)胞、CTLL-2細(xì)胞、NR8383.1細(xì)胞 PLC-8024細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:aTC1-6細(xì)胞、BT-B細(xì)胞、AMC-HN8細(xì)胞 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MDAMB231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUTZ-1細(xì)胞、PANC-08-13細(xì)胞、H128細(xì)胞 RBL2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細(xì)胞、NCTC 929細(xì)胞、NCI-SNU-449細(xì)胞 CCLP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細(xì)胞、CORL51細(xì)胞、A20細(xì)胞 BSC-40細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC/9細(xì)胞、WiDrTC細(xì)胞、ANA1細(xì)胞 RPMI no 8226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH82細(xì)胞、KYSE-450細(xì)胞、ARH77細(xì)胞 NCI-H1092細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 2650細(xì)胞、COR-L105細(xì)胞、KOSC-2細(xì)胞 MODE-K細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-4B細(xì)胞、GM03190A細(xì)胞、H-69細(xì)胞 T/G HA-VSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-433細(xì)胞、PLC/PRF5細(xì)胞、NCI-H1563細(xì)胞 TW01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI3B細(xì)胞、CCD966SK細(xì)胞、SKRC-39細(xì)胞 SEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-a2細(xì)胞、OC-3-VGH細(xì)胞、WM115細(xì)胞 Ly19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CRFK細(xì)胞、SuperTube細(xì)胞、NB9細(xì)胞 Tohoku Hospital Pediatrics-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2107細(xì)胞、NCI-H1581細(xì)胞、NFS-60細(xì)胞 HCC-2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Embryonic Skin細(xì)胞、N-9細(xì)胞、KYSE-520細(xì)胞 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