"SK-N-SH epithelioid cells人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:SK-N-SH細(xì)胞系由J.L.Bieder建系,它與SK-N-MC所不同的是倍增時(shí)間較長(zhǎng)且多巴胺-β-羥基酶水平較高。 SK-N-SH在細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)中用作靶細(xì)胞系。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問(wèn)題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。4.離心問(wèn)題:目前主要有兩種見(jiàn)解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來(lái)說(shuō),把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過(guò)了活細(xì)胞會(huì)受壓過(guò)大,死亡。此外在操作過(guò)程中容易污染,所以不推薦。另一種說(shuō)法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無(wú)異常。5.細(xì)胞貼壁少的問(wèn)題:教科書(shū)中說(shuō)明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問(wèn)題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過(guò)多,細(xì)胞濃度過(guò)低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問(wèn)題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問(wèn)題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),從以前的資料來(lái)看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒(méi)有什么影響,還有一個(gè)說(shuō)法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話(huà)那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無(wú)害濃度。 OVCAR.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero C1008細(xì)胞、SKNEP1細(xì)胞、Madin Darby Canine Kidney細(xì)胞 U138MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT3細(xì)胞、Y3.AG.1.2.3細(xì)胞、MSTO-211 H細(xì)胞 LMH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SAOS 2細(xì)胞、Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞、NCI-H920細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 SK-N-SH epithelioid cells人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠(chǎng)商提供之血清為無(wú)菌,不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,勿直接過(guò)濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。不建議用過(guò)濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因?yàn)闀?huì)阻塞過(guò)濾膜。顯微鏡下觀(guān)察之“小黑點(diǎn)”:通常經(jīng)過(guò)熱處理之血清,沈淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀(guān)察像是“小黑點(diǎn)”,常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會(huì)使此沈淀物增多,更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測(cè),又沒(méi)有污染。一般而言,此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng),但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號(hào)的血清。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 University of Arizona Cell Culture-893細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM2132細(xì)胞、SKBr3細(xì)胞、Sp2/O細(xì)胞 CFPAC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PJ34細(xì)胞、143B TK-細(xì)胞、G-402細(xì)胞 A2780S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OE-33細(xì)胞、3T3 clone A31細(xì)胞、WSU-DLCL2細(xì)胞 HCT 116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1694細(xì)胞、MOLT-16細(xì)胞、Metastatic Variant-522細(xì)胞 OSC19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BL-6細(xì)胞、SEG-1細(xì)胞、SU86_86細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 SK-N-SH epithelioid cells人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話(huà),需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn),不會(huì)臨時(shí)要處理,手足無(wú)措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無(wú)菌操作,多噴噴酒精,要是對(duì)滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話(huà)在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè);4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話(huà)盤(pán)里的水也會(huì)很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開(kāi)的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺(tái)是用完就開(kāi);6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 RPMI 2650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT細(xì)胞、HuLEC-5a細(xì)胞、H-735細(xì)胞 RBE4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B95-8細(xì)胞、MCF-12F細(xì)胞、NCIH522細(xì)胞 HSF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C3H10T1/2 clone8細(xì)胞、MGECs細(xì)胞、NCIH2106細(xì)胞 IMR90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Natural Killer-92細(xì)胞、Line 522細(xì)胞、COLO684細(xì)胞 FAK+/+細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1869細(xì)胞、Melanoma 14細(xì)胞、RD-ES細(xì)胞 CCRF SB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1355細(xì)胞、KTCTL-140細(xì)胞、A101D細(xì)胞 HDQ-P1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT.116細(xì)胞、A-673細(xì)胞、HIEC細(xì)胞 TE-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK MEL 28細(xì)胞、MFC細(xì)胞、REC-1細(xì)胞 SK-SH-SY5Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGY-7701細(xì)胞、SKO007細(xì)胞、RS4;11細(xì)胞 SNU-620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DoHH2細(xì)胞、NPC-TW01細(xì)胞、NCIH1435細(xì)胞 SK-N-SH epithelioid cells人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 KTC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMM39細(xì)胞、3T3 Swiss Albino細(xì)胞、HCC-94細(xì)胞 ZR-75-30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBC-1/original細(xì)胞、SiHa細(xì)胞、EAC-E2G8細(xì)胞 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