"A2780 epithelioid cells人卵巢癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 VCaP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs274T細(xì)胞、LNCaP-C4-2細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞 KAT-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2030細(xì)胞、NCIH1993細(xì)胞、CMT93細(xì)胞 SVG p12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1688細(xì)胞、HEP3B2細(xì)胞、CAL78細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 A2780 epithelioid cells人卵巢癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 冷凍細(xì)胞解凍程序:依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒?yàn)需要,必須有所不同時(shí),務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對(duì)細(xì)胞而言差異極大,請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺(tái)內(nèi)取10ml培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25或T75flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO,不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10ml培養(yǎng)基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 MLOY4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC615.3細(xì)胞、GM346細(xì)胞、GM00346細(xì)胞 U118-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV-HUC細(xì)胞、brain-derived Endothelial cells.3細(xì)胞、GH 3細(xì)胞 FRTL5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPASMC細(xì)胞、HARA-B細(xì)胞、FDCP-1細(xì)胞 NCI H716細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly10細(xì)胞、NW-38細(xì)胞、SW 1990細(xì)胞 FU-MMT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KG-1a細(xì)胞、H-522細(xì)胞、SK-Mel 2細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 A2780 epithelioid cells人卵巢癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 HELF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BAR-T細(xì)胞、MBT-2細(xì)胞、CAL-120細(xì)胞 HEK 293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM266細(xì)胞、PaTu8988s細(xì)胞、LN382細(xì)胞 S3 HeLa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB 231細(xì)胞、MPVECs細(xì)胞、Melan-a細(xì)胞 AR4-IP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S3 HeLa細(xì)胞、Scott and White No. 13細(xì)胞、Rat Fetal Lung-6細(xì)胞 NHDF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 33細(xì)胞、UCLA-SO-M21細(xì)胞、D341 Med細(xì)胞 KTCTL140細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2009細(xì)胞、Evsa-T細(xì)胞、COLO 678細(xì)胞 NBL-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RL952細(xì)胞、H-2085細(xì)胞、WSUDLCL2細(xì)胞 OVSAHO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-266-mel細(xì)胞、Hs683T細(xì)胞、UWB1.289+BRCA1細(xì)胞 JROECL33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS-411N細(xì)胞、HEK AD293細(xì)胞、OCI-AML5細(xì)胞 NCIH522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa16C細(xì)胞、CAL 120細(xì)胞、OVCAR433細(xì)胞 A2780 epithelioid cells人卵巢癌細(xì)胞系 SK-HEP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKM-1細(xì)胞、MC3T3-E1細(xì)胞、rRMECs細(xì)胞 H-1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFPAC1細(xì)胞、NCIH1581細(xì)胞、KOSC-2 cl3-43細(xì)胞 RBL2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細(xì)胞、NCTC 929細(xì)胞、NCI-SNU-449細(xì)胞 Y-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細(xì)胞、Panc4.03細(xì)胞、HEC251細(xì)胞 HO8910細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1B細(xì)胞、HBZY 1細(xì)胞、H-2330細(xì)胞 hs 68細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSB1細(xì)胞、MOLP-2細(xì)胞、RBL2H3細(xì)胞 hs 68細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSB1細(xì)胞、MOLP-2細(xì)胞、RBL2H3細(xì)胞 Mouse Bladder Tumor line-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87-1細(xì)胞、Porcine Kidney-15細(xì)胞、IPLB-SF-21細(xì)胞 C26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS123細(xì)胞、TNC-1B12B4細(xì)胞、H9c2細(xì)胞 MGSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 115細(xì)胞、Hs675細(xì)胞、16HBE14o-細(xì)胞 OK-WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BBE細(xì)胞、AML-193細(xì)胞、PLA-801C細(xì)胞 NCIH2591細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KS-SLK細(xì)胞、Mouse Colon 38細(xì)胞、Meat Animal Research Center-145細(xì)胞 Human Epithelioma-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1171細(xì)胞、SNK6細(xì)胞、TEV-1細(xì)胞 H2029細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL27細(xì)胞、Panc08.13細(xì)胞、Hs 274細(xì)胞 G-401細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH889細(xì)胞、OC316細(xì)胞、Asian Medical Center-Head and Neck cancer-8細(xì)胞 Wien-133細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-322細(xì)胞、NL20細(xì)胞、NCIH2030細(xì)胞 K-562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GFP-Olig2細(xì)胞、Colo205細(xì)胞、H3255細(xì)胞 H-1435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:YD15細(xì)胞、H-2135細(xì)胞、OCI/AML2細(xì)胞 OCILY7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-520細(xì)胞、PT-67細(xì)胞、Hs839T細(xì)胞 SGC7901/DDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC 97-H細(xì)胞、SUM190PT細(xì)胞、Co-115細(xì)胞 D10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDLM2細(xì)胞、ACC-2細(xì)胞、AAV293細(xì)胞 Emory University-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI747細(xì)胞、CHP100細(xì)胞、Capan-2細(xì)胞 U251n細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IM-9細(xì)胞、NCIH748細(xì)胞、H-1672細(xì)胞 H-1781細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RD-2細(xì)胞、CHG-5細(xì)胞、HSC4細(xì)胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep-3B細(xì)胞、KM12 SM細(xì)胞、HEK293E細(xì)胞 NIH:OVCAR-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPTEC TERT1細(xì)胞、HONE-1細(xì)胞、MDA MB 175 VII細(xì)胞 NCIH1836細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-451Lu細(xì)胞、HUT-125細(xì)胞、OVCAR 433細(xì)胞 QGY7701細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U343細(xì)胞、CX1細(xì)胞、AM細(xì)胞 MX1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BXPC3細(xì)胞、ASH-3細(xì)胞、Lu-65細(xì)胞 Pa17C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-345細(xì)胞、2B4-L細(xì)胞、HT 1197.T細(xì)胞 Hs840T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BTI-Tn5B14細(xì)胞、NCI H548細(xì)胞、HT-55細(xì)胞 PANC 1005細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEP2D細(xì)胞、Psi-2-DAP細(xì)胞、JVM-3細(xì)胞 U-118-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP4細(xì)胞、Hs611T細(xì)胞、NB-9細(xì)胞 Huh-7.5.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-cells細(xì)胞、NPA87細(xì)胞、SMA-560細(xì)胞 X63-Ag8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H187細(xì)胞、SW 1783細(xì)胞、H1930細(xì)胞 COLO-320-DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GEO細(xì)胞、KYSE-520細(xì)胞、SW1353細(xì)胞 KCL22細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC9811-P細(xì)胞、EC-GI細(xì)胞、Hs27F細(xì)胞 NCI-H2066細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_08_13細(xì)胞、Hs606T細(xì)胞、3T3細(xì)胞 BEL7402細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS細(xì)胞、2PK3細(xì)胞、Potorous tridactylus Kidney 2細(xì)胞 ASH3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:University of Michigan-Renal Carcinoma-2細(xì)胞、MM1細(xì)胞、NCTC-929細(xì)胞 U-373MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Astrocyte type I 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