"NCI-H295R Cell:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞系
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞背景資料：腎上腺皮質(zhì)癌；女性
C3H/10T1/2-clone8細胞系相關產(chǎn)品：MSF細胞、SW-962細胞、NSC-34細胞
Hs832.Tc細胞系相關產(chǎn)品：Vero 76細胞、MDAMB231細胞、NCI-A549細胞
293-EBNA細胞系相關產(chǎn)品：Calf Pulmonary Artery Endothelial細胞、NRK49F細胞、CBRH-7919細胞
mIMCD-3細胞系相關產(chǎn)品：NIH:OVCAR4細胞、BJA-B細胞、H1882細胞
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
NCI-H295R Cell:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞系
細胞傳代時消化的問題：可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況你自己把握）。這是第四步。其實還可以有第五步，對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低，保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了，如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結：１)一般客戶拿到細胞后，應該注意什么？客戶收到細胞后先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞１００X，２００X各一張)，排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過８０%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下１０ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過８０%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、１０００轉(zhuǎn)/分鐘離心２分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制；２)快遞細胞多久能到，是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞？我們采用快遞發(fā)貨，一般外地２--３天，寄細胞前請確認當?shù)販囟?，如果氣溫低于４度的，則采用郵寄凍存細胞；３)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活；４)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
COV-434細胞系相關產(chǎn)品：HT-1376細胞、PNT-1A細胞、B16BL6細胞
CG4細胞系相關產(chǎn)品：PaTu 8988s細胞、PLC/PRF/5細胞、HCC1954-BL細胞
2780CP細胞系相關產(chǎn)品：KOPN8細胞、TFH細胞、CHP-100細胞
H2029細胞系相關產(chǎn)品：CAL27細胞、Panc08.13細胞、Hs 274細胞
TALL-104細胞系相關產(chǎn)品：Mino細胞、LTEP-sm 1細胞、HEK-293-EBNA細胞
細胞生長特性：貼壁
NCI-H295R Cell:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞系
細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析：總結１：復蘇過程沒有問題，是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS １５-２０%，看看能否幫助貼壁，當然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細胞沒問題?？偨Y２：首先應該懷疑凍存，實際上復蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單，而且死板。１、你凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。２、你的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會死亡。３、你的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過７%，大于５%，太多也不好。４、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。５、你的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。６、如果你細胞污染，你是否能很快看到，我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。７、你的細胞在凍存前是否過密。還有，不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話，這個細菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌，問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜，否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題，這個見得太多了，別不當會事。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
2V6.11細胞系相關產(chǎn)品：IPLB-Sf21AE細胞、NCIH1299細胞、WC00044細胞
CRFK細胞系相關產(chǎn)品：TCC-PAN2細胞、JVM3細胞、NCI.H522細胞
Hs 832(C).T細胞系相關產(chǎn)品：H-2085細胞、NW38細胞、HCC-202細胞
WIL2S細胞系相關產(chǎn)品：TGW細胞、HOC細胞、SF-539細胞
Y3-Ag1,2,3細胞系相關產(chǎn)品：HO-8910細胞、CD18/HPAF細胞、LLC-MK2細胞
9L細胞系相關產(chǎn)品：ZYM-DIEC02細胞、Homo sapiens No. 578, tumor cells細胞、HCC1008細胞
TOV21細胞系相關產(chǎn)品：H-1563細胞、MDA-231細胞、OCI-Ly18細胞
NCI-H295R Cell:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞系
KU812-F細胞系相關產(chǎn)品：639V細胞、B35細胞、Pro-5 Lec1.3c細胞
IPLB-Sf21AE細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H378細胞、NCI-SNU-520細胞、hFOB細胞
JHH-7細胞系相關產(chǎn)品：GM03671細胞、Hs_578t細胞、HBE 135-E6E7細胞
C28/I2細胞系相關產(chǎn)品：CHO/dhFr-細胞、Hos TE-85細胞、526 mel細胞
EAC細胞系相關產(chǎn)品：U-373 MG細胞、Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細胞、Swiss-3T3細胞
Madin Darby Canine Kidney細胞系相關產(chǎn)品：M20 [Human melanoma]細胞、SK-MEL5細胞、TM-4細胞
GM00637細胞系相關產(chǎn)品：KYSE0410細胞、H847細胞、CTSC-3細胞
HOS TE 85細胞系相關產(chǎn)品：293AD細胞、LI7細胞、MOVAS-1細胞
SUM 190細胞系相關產(chǎn)品：SV-HUC-1細胞、SH-SY5Y Parental細胞、HPAF-II/CD18細胞
SUM 190細胞系相關產(chǎn)品：SV-HUC-1細胞、SH-SY5Y Parental細胞、HPAF-II/CD18細胞
COLO-684細胞系相關產(chǎn)品：DMS 273細胞、NCI-SNU-668細胞、Hs852細胞
KFB細胞系相關產(chǎn)品：YAC-1細胞、KYSE0030細胞、TK-10細胞
Mel624細胞系相關產(chǎn)品：NCIH847細胞、CAL 148細胞、SK Mel 24細胞
KOPN-8細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1954細胞、FRO 81-2細胞、SW 1088細胞
P3X63Ag8.653細胞系相關產(chǎn)品：SW 48細胞、CMT-167細胞、Beta-TC-6細胞
CEM-C7細胞系相關產(chǎn)品：CAL120細胞、NOMO-1細胞、Farage OL細胞
NCIH2227細胞系相關產(chǎn)品：OK細胞、RCC-JF細胞、HMrSV5細胞
PANC-04-03細胞系相關產(chǎn)品：MPC-83細胞、ADR-RES細胞、H-II-E-C3細胞
Panc_05_04細胞系相關產(chǎn)品：JIMT1細胞、H2172細胞、McARH7777細胞
L78細胞系相關產(chǎn)品：L929(NCTC)細胞、HEC-151細胞、MCF-12F細胞
EST50細胞系相關產(chǎn)品：CCD-1095Sk細胞、GLRK 13細胞、SKES1細胞
WM115細胞系相關產(chǎn)品：NE1細胞、SN12PM6細胞、Jurkat FHCRC細胞
U031細胞系相關產(chǎn)品：HEL299細胞、NCIH1385細胞、CCF-STTG1細胞
H1963細胞系相關產(chǎn)品：SK Col 1細胞、GA-10 clone 4細胞、MCF-7/ADR細胞
T8細胞系相關產(chǎn)品：Lu-65細胞、SK-SH-SY5Y細胞、RCC23細胞
RPMI7666細胞系相關產(chǎn)品：MFD-1細胞、EFM192C細胞、Panc_05_04細胞
UCLA-SO-M20細胞系相關產(chǎn)品：HCC-2935細胞、Henrietta Lacks cells細胞、BC-3H-1細胞
b.End3細胞系相關產(chǎn)品：Calu 6細胞、C1498細胞、8305-C細胞
EnCa1細胞系相關產(chǎn)品：K7M2-WT細胞、CHL-11細胞、NCI-H2023細胞
HEL-299細胞系相關產(chǎn)品：EoL-1細胞、TE3A細胞、NCIH810細胞
C2BBe 1細胞系相關產(chǎn)品：KYSE-510細胞、Hepa-RG細胞、130T細胞
RS4:11細胞系相關產(chǎn)品：PC-3/M細胞、Ramos (RA 1)細胞、COLO-394細胞
TE9細胞系相關產(chǎn)品：GM03569細胞、NCIH838細胞、RPMI-6666細胞
A-375SM細胞系相關產(chǎn)品：HCa/16A3-F細胞、NCIH1355細胞、NR8383細胞
NCI660細胞系相關產(chǎn)品：87 MG細胞、NCI-H23細胞、MV 4;11細胞
TYKnu細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1915細胞、OVSAHO細胞、Fortner's melanotic melanoma #3細胞
H-2170細胞系相關產(chǎn)品：WILL-2細胞、Y-79細胞、RN-c細胞
Granta-519細胞系相關產(chǎn)品：RMS13細胞、RPMI 8226/S細胞、SUM 102PT細胞
PC3M-1E8細胞系相關產(chǎn)品：CEMx721.174.T2細胞、MC3T3-E1 Subclone 4細胞、Hs839.T細胞
COLO-741細胞系相關產(chǎn)品：HPAF2細胞、Swiss/3T3細胞、MDA-435細胞
COLO-741細胞系相關產(chǎn)品：HPAF2細胞、Swiss/3T3細胞、MDA-435細胞
YD-38細胞系相關產(chǎn)品：H64細胞、293-FT細胞、MS 751細胞
A72細胞系相關產(chǎn)品：JROECL19細胞、P3/NS1/1-Ag4.1細胞、PF382細胞
NCI-H295R Cell:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞系
GM05862細胞系相關產(chǎn)品：H-1404細胞、Hs695T細胞、OVCA-433細胞
Renal Carcinoma細胞系相關產(chǎn)品：LNCaP subline C4-2細胞、H9c2細胞、Hs 888.T細胞
NPC-TW039細胞系相關產(chǎn)品：Madison lung細胞、HCC-1954細胞、Ramos (RA)細胞
Metastatic Variant 522細胞系相關產(chǎn)品：ZR-75-30細胞、MV3細胞、MKN-74細胞
SK MEL 28細胞系相關產(chǎn)品：Fetal Human Colon細胞、NP69細胞、HREC細胞
MAVER-1細胞系相關產(chǎn)品：AML-193細胞、NCI-H2170細胞、SNU-520細胞
GM02131A細胞系相關產(chǎn)品：B16/F10細胞、PLC-8024細胞、MDA MB 453細胞
SJ-Rh 30細胞系相關產(chǎn)品：LLC PK1細胞、H716細胞、RKN細胞
SGC-996細胞系相關產(chǎn)品：Hs 604.T細胞、HCET細胞、LAN1細胞
FRhK4細胞系相關產(chǎn)品：NCIH508細胞、CCLP-1細胞、Tn 5B1-4細胞
SU86-86細胞系相關產(chǎn)品：H-4細胞、S3 HeLa細胞、UPCI:SCC090細胞
MOLM13細胞系相關產(chǎn)品：CAL 85-1細胞、M2-10B4細胞、KLM-1細胞
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關鍵字： NCI-H295R Cell:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞系
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