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龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法),Mycobacterium cheloei

龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法)

價格 3490
包裝 50T
最小起訂量 50T
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法)英文名稱:Mycobacterium cheloei
保存條件: 低溫運輸,-20℃保存純度規(guī)格: 99.9%
產(chǎn)品類別: PCR試劑盒 探針法熒光定量PCR試劑盒
2024-12-25 龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法) Mycobacterium cheloei 50T/3490RMB 3490 低溫運輸,-20℃保存 99.9% PCR試劑盒 探針法熒光定量PCR試劑盒

龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法)

Mycobacterium cheloei

產(chǎn)品及特點: 

 

熒光定量PCR法檢測的是來SYBR Green摻入到雙鏈DNA中的量。SYBR Green摻入到雙鏈DNA中后會發(fā)出熒光。但是只要是雙鏈,它都摻。
而探針自法是當(dāng)探針結(jié)合到目標(biāo)序列上以百后,聚合酶降解探針后,探針上自帶的熒光基團離開淬滅基團,從而發(fā)度出熒光。
從兩者的原理上來看,不難知判斷,熒光PCR法更加簡單方便,而且成本低。而探針法特異性更強道。

①熒光域值(threshold)的設(shè)定:PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個循環(huán)的熒光信號標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍
②Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù) 二、3個階段 ①熒光背景信號階段:在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號。

產(chǎn)品名稱

方法

規(guī)格

價格

龜分枝桿菌LAMP試劑盒

LAMP

50次

2490元

龜分枝桿菌PCR試劑盒

PCR

50次

1490元

龜分枝桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50次

2490元

龜分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

探針法

50次

3490元

 

它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)龜分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

 

成分

編號

十孔盒包裝

探針法 qRT-PCR 緩沖液

A

500μL(黃蓋)

探針法 qRT-PCR 酶混合液

B

100μL(紅蓋)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

C

1 mL(黃蓋)

龜分枝桿菌探針法 qRT-PCR引物混合液

D

100 μL(白蓋)

龜分枝桿菌探針法 qRT-PCR 探針

E

50 μL(棕色管)

龜分枝桿菌探針法 qRT-PCR陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)

F

50 μL(黃蓋)

核酸釋釋劑(試用裝)

G

20 次(1mL,綠蓋)

使用手冊

H

一份

 

運輸及保存: 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。

 

自備試劑:樣品 RNA。

 

使用方法

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7. 如果有N個樣品,設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。也以選購本公司的柱式病毒RNAout。本試劑盒免費贈送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板,省略了RNA提取步驟。

三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR 管,其中N+2個用于上步得到的 N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4 個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管N+2個

RT-PCR陰性對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管

(2-7 管)

探針法qPCR緩沖液

各 10 μL

10 μL

各 10 μL

探針法 qPCR 酶混合液

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

龜分枝桿菌探針法qRT-PCR探針

各 1 μL

1 μL

各 1 μL

龜分枝桿菌探針法探針qRT-PCR

引物混合液

各 2 μL

 2 μL

各 2 μL

待測樣品 RNA 模板

各 5 μL

--

--

超純水

--

5 μL

--

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(2-7 號)

--

--

各5 μL(2號樣到2號管,3號樣到3 號管…)

11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 qRT-PCR:

過程

溫度

時間

逆轉(zhuǎn)錄

50℃

30 min

預(yù)變性

94℃

10 min

qRT-PCR 反應(yīng)(40 個循環(huán))

94℃

15 sec

60℃

1 min(采集 FAM 通道的熒光信號)

 

五、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。

熒光探針定量PCR檢測原理

 

探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。

1.傳統(tǒng)定量PCR方法簡介

1)內(nèi)參照法:在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。

2)競爭法:選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

3)PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗地高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

關(guān)鍵字: 龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法);龜分枝桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒;龜分枝桿菌恒溫法熒光定量PCR試劑盒

公司簡介

上海澤葉生物科技有限公司是一家服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè),主要為科研機構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開發(fā)研究提供所需要的科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細胞學(xué)、材料科學(xué),通用試劑、藥物合成試劑、手性化合物、催化劑及配體、分析試劑、生物試劑,檢測試劑等等
成立日期 2016-08-08 (9年) 注冊資本 100萬元整
員工人數(shù) 1-10人 年營業(yè)額 ¥ 100萬以內(nèi)
主營行業(yè) 生物化工,有機原料,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料,技術(shù)服務(wù) 經(jīng)營模式 貿(mào)易,試劑,定制,服務(wù)
  • 上海澤葉生物科技有限公司
VIP 6年
  • 公司成立:9年
  • 注冊資本:100萬元整
  • 企業(yè)類型:貿(mào)易
  • 主營產(chǎn)品:主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒、重組蛋白、抗體、生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、分子生物學(xué)試劑、細胞生物學(xué)等科研用品
  • 公司地址:松江區(qū)新橋鎮(zhèn)賣新公里2077號8309室
詢盤

龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒(探針法)相關(guān)廠家報價

產(chǎn)品名稱 價格   公司名稱 報價日期
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上??道噬锟萍加邢薰?/div>
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上海撫生實業(yè)有限公司
2022-08-19
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