"CZ-1 Cell:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:骨髓瘤;男性 6T-CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-449細(xì)胞、MALME 3M細(xì)胞、Cattle chondrocytes細(xì)胞 Epithelioma Papulosum Cyprini細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EOMA細(xì)胞、McCoy B細(xì)胞、MES-SA Dx5細(xì)胞 RM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH208細(xì)胞、RAMSCs細(xì)胞、CFPAC-1細(xì)胞 NK-92 transfected with MFG-hIL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293GP細(xì)胞、KY70細(xì)胞、CHO-ori細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 CZ-1 Cell:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系 如何把細(xì)胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細(xì)胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個(gè)不僅僅是說(shuō)培養(yǎng)基的不同,還有就是細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度問(wèn)題。有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長(zhǎng),生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好,譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞,生長(zhǎng)速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞,這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng),而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候,細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了,老化的會(huì)比較多,對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度問(wèn)題。2.對(duì)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問(wèn)題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞,如果細(xì)胞形態(tài)不好,(或者細(xì)胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無(wú)血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進(jìn)行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過(guò)一遍,然后吸走。這時(shí)侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細(xì)胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn),已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺(tái),底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞完美形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。3.關(guān)于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入培養(yǎng)基的量的問(wèn)題。這個(gè)是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細(xì)胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)相反細(xì)胞形態(tài)會(huì)長(zhǎng)得比較好。(可能也是競(jìng)爭(zhēng)很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對(duì)于生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞,易生長(zhǎng)的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是要注意換液掌握。4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問(wèn)題。個(gè)人發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在玻璃瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的狀態(tài)會(huì)比一次性相對(duì)好一些。而對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長(zhǎng)旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶?jī)?nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因?yàn)楸炔A扛菀踪N壁。生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在這種相對(duì)“更安逸”的環(huán)境里反而長(zhǎng)得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài),比玻璃瓶會(huì)好,對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞,玻璃瓶則會(huì)更好。同樣,對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長(zhǎng)速度慢的時(shí)候,會(huì)好一點(diǎn),比如剛剛復(fù)蘇的時(shí)候,或者原代培養(yǎng)的時(shí)候。而在其生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候,玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,不會(huì)臨時(shí)要處理,手足無(wú)措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無(wú)菌操作,多噴噴酒精,要是對(duì)滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè);4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺(tái)是用完就開;6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 TGW-nu-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep2細(xì)胞、SW 626細(xì)胞、SF-539 BT細(xì)胞 C-127細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McARH7777細(xì)胞、TOV112細(xì)胞、BPH-1細(xì)胞 K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McCoy B細(xì)胞、PLA-802細(xì)胞、PNEC30細(xì)胞 U-87 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAC細(xì)胞、L-6TG細(xì)胞、ST 486細(xì)胞 OVCAR10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U 937細(xì)胞、LS-180細(xì)胞、SAOS 2細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮 CZ-1 Cell:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問(wèn)題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。4.離心問(wèn)題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來(lái)說(shuō),把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過(guò)了活細(xì)胞會(huì)受壓過(guò)大,死亡。此外在操作過(guò)程中容易污染,所以不推薦。另一種說(shuō)法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無(wú)異常。5.細(xì)胞貼壁少的問(wèn)題:教科書中說(shuō)明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問(wèn)題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過(guò)多,細(xì)胞濃度過(guò)低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問(wèn)題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問(wèn)題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),從以前的資料來(lái)看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒(méi)有什么影響,還有一個(gè)說(shuō)法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無(wú)害濃度。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說(shuō)明書 LS-411N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:N-87細(xì)胞、H1648細(xì)胞、MESSA細(xì)胞 Japanese Tissue Culture-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-8細(xì)胞、Human Embryo Lung-1細(xì)胞、LLC-PK(1)細(xì)胞 COR-L26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EJ 138細(xì)胞、Psi2 DAP細(xì)胞、JB-6細(xì)胞 CFPAC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH524細(xì)胞、HEL9217細(xì)胞、DMS-153細(xì)胞 87MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJA-B-1細(xì)胞、SK-RC 42細(xì)胞、GA10細(xì)胞 COLO320DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC-1spg細(xì)胞、HFF細(xì)胞、HEL 92.1.7細(xì)胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB361細(xì)胞、SW-837細(xì)胞、Cloudman M3細(xì)胞 CZ-1 Cell:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系 G519細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H747細(xì)胞、OVCAR-432細(xì)胞、GTL 16細(xì)胞 J774A.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D:cl3細(xì)胞、UCLA-SO-14細(xì)胞、U-138-MG細(xì)胞 C81-61細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB 6細(xì)胞、Hs 445細(xì)胞、Panc8.13細(xì)胞 OsA-CL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE11細(xì)胞、TE6細(xì)胞、NRK 52E細(xì)胞 OB2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lieming Xu-2細(xì)胞、OCI/AML4細(xì)胞、A2780細(xì)胞 Immortalized Human Hepatocytes細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-7721細(xì)胞、H-774細(xì)胞、CaES-17細(xì)胞 H-2030細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCIAML4細(xì)胞、HCC827細(xì)胞、H-128細(xì)胞 NCI.H226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1-B細(xì)胞、5-8F細(xì)胞、NCI H508細(xì)胞 D-341 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR8/ADR細(xì)胞、EOC-20細(xì)胞、HuCC-T1細(xì)胞 D-341 Med細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR8/ADR細(xì)胞、EOC-20細(xì)胞、HuCC-T1細(xì)胞 MDA 1386細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC2/Ad細(xì)胞、Huh-7.5.1細(xì)胞、HCC2185細(xì)胞 Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC 12細(xì)胞、NCI-H810細(xì)胞、Hs 578.T細(xì)胞 MM134細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H526細(xì)胞、SKOV-433細(xì)胞、KFB細(xì)胞 A-375SM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCa/16A3-F細(xì)胞、NCIH1355細(xì)胞、NR8383細(xì)胞 CLL-CII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW13細(xì)胞、H-441細(xì)胞、D341Med細(xì)胞 WILL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-128細(xì)胞、CORL279細(xì)胞、OVCAR-4細(xì)胞 kms 11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hopkins-92細(xì)胞、293-EBNA1細(xì)胞、H-1155細(xì)胞 DHL-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLMA細(xì)胞、H719細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞 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