"CCD-841CoTr Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:結(jié)腸癌;SV40轉(zhuǎn)化;女性 SKCO1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC3M-1E8細(xì)胞、NG108-15細(xì)胞、RBVEC細(xì)胞 TNC-1B12B4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa18C細(xì)胞、G-402細(xì)胞、U373MG細(xì)胞 SuDHL 5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 578.Bst細(xì)胞、LS-411細(xì)胞、ChaGo K-1細(xì)胞 Hs737T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KLN 205細(xì)胞、MDAMB468細(xì)胞、HA細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 CCD-841CoTr Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 細(xì)胞傳代時(shí)消化的問題:可以這樣說,對于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對這個(gè)細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過這個(gè)問題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個(gè)問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細(xì)胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個(gè)問題就是,細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對細(xì)胞是不公平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。我后來對消化的方法進(jìn)行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。(以難消化細(xì)胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察,待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細(xì)胞間隙明顯,細(xì)胞獨(dú)立開來的時(shí)候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實(shí)際情況你自己把握)。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步,對于特別難消化的細(xì)胞和對胰酶特別敏感的細(xì)胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對細(xì)胞的損傷降到最低,保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了,如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個(gè)是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會(huì)的。建議你接受一個(gè)新細(xì)胞時(shí)把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來做比較,去摸索好細(xì)胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。將細(xì)胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細(xì)胞的損傷之外,還有一個(gè)更重要的作用就是,可以程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài),不成片不連體。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過程錯(cuò)誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸渾細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤;細(xì)胞置于-80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動(dòng)物細(xì)胞,其離心速率一般為300×g(約1O(jiān)OOrpm),5-10分鐘,轉(zhuǎn)速過高或離心時(shí)間過長都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r為離心機(jī)轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部內(nèi)壁的距離;rpm為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù);RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來表示單位。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NPC-TW 039細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Leghorn Male Hepatoma cell line細(xì)胞、LLC PK1細(xì)胞、CAL51細(xì)胞 SK-RC 52細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BLO11細(xì)胞、McCoy細(xì)胞、Vertebral Cancer of the Prostate細(xì)胞 NTERA-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCMK1細(xì)胞、FD-LSC-1細(xì)胞、NCI-H378細(xì)胞 A 172細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A427細(xì)胞、BEAS2B細(xì)胞、Tissue Culture-1細(xì)胞 HCV 29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly19細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細(xì)胞、OSRC2細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁 CCD-841CoTr Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測試工作帶來了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點(diǎn)下降,提高細(xì)胞膜對水的通透性,且對細(xì)胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會(huì),從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 HCC-2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Embryonic Skin細(xì)胞、N-9細(xì)胞、KYSE-520細(xì)胞 OVCAR 420細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 02.03細(xì)胞、GM01232細(xì)胞、Hs675T細(xì)胞 NTera 2/cl.D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1155細(xì)胞、OVCAR432細(xì)胞、ssMCF-7細(xì)胞 NCIH2029細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:16-HBE細(xì)胞、CFPAC1細(xì)胞、Transformed Human Liver Epithelial-3細(xì)胞 AN3-CA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA-SO-M20細(xì)胞、GM16136細(xì)胞、SNK-1細(xì)胞 KYSE-70細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK/293細(xì)胞、NCI-H82細(xì)胞、Nthy-ori 3.1細(xì)胞 Ramos 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBE 135-E6/E7細(xì)胞、SK-N-BE-2c細(xì)胞、Sc-1細(xì)胞 CCD-841CoTr Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 TE354T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2008細(xì)胞、RPMI6666細(xì)胞、PANC 813細(xì)胞 JeKo-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM2細(xì)胞、BCP-1細(xì)胞、H1734細(xì)胞 Hs 888.Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT細(xì)胞、PL12細(xì)胞、P3J細(xì)胞 SK Mel 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VK2細(xì)胞、H.Ep. No. 2細(xì)胞、GH3細(xì)胞 SHP77細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-683細(xì)胞、PFSK細(xì)胞、TE-10細(xì)胞 KTC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 8226細(xì)胞、UMC11細(xì)胞、A 375細(xì)胞 MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1666_DA細(xì)胞、526mel細(xì)胞、Lung cancer-1/squamous細(xì)胞 MODE-K細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-4B細(xì)胞、GM03190A細(xì)胞、H-69細(xì)胞 HEK-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos 2G6.4C10細(xì)胞、OCI-Ly19細(xì)胞、NPA'87細(xì)胞 HEK-293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos 2G6.4C10細(xì)胞、OCI-Ly19細(xì)胞、NPA'87細(xì)胞 H9c2 (2-1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT clone H9細(xì)胞、SKRC-52細(xì)胞、LIPF155C細(xì)胞 SMC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM07404A細(xì)胞、FRTL5細(xì)胞、Caki-2細(xì)胞 H-128細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H125細(xì)胞、UO-31細(xì)胞、H-9細(xì)胞 MDA-PCa-2b細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2110細(xì)胞、HT144mel細(xì)胞、MLMEC細(xì)胞 HEK 293T/17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKML-28細(xì)胞、FHs 74 Int細(xì)胞、BHT-101細(xì)胞 HCC2185細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEL-7402細(xì)胞、CCD-33Co細(xì)胞、B16/F0細(xì)胞 C-32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EST81細(xì)胞、Cloudman M3細(xì)胞、UK Pan-1細(xì)胞 KG-1a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HVSMC細(xì)胞、ROS17/28細(xì)胞、QG-56細(xì)胞 WIL2 S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OSKM-1細(xì)胞、SW-1222細(xì)胞、HCC-2218細(xì)胞 NRK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DC2.4細(xì)胞、Sp2/O-Ag14細(xì)胞、NCTC-3960細(xì)胞 MDA-MB453細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD966SK細(xì)胞、NCI-H1734細(xì)胞、NCIH2135細(xì)胞 YT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LLC細(xì)胞、HCEpiC細(xì)胞、SKNMC細(xì)胞 IBRS-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis Lung Cancer細(xì)胞、OV2008細(xì)胞、NCIH1092細(xì)胞 CD18/HPAF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-9細(xì)胞、RL95-2細(xì)胞、Chinese Hamster Lung細(xì)胞 U87MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OE-19細(xì)胞、EFM-192C細(xì)胞、BHK 21細(xì)胞 HS852.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL-299細(xì)胞、NCIH1915細(xì)胞、Fetal Rhesus Kidney-4細(xì)胞 IMR-32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BpRcl細(xì)胞、SKNF1細(xì)胞、Hs729T細(xì)胞 SNUC2A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A 549細(xì)胞、Panc_02_03細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-12A細(xì)胞 LS411N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-510細(xì)胞、GM2219C細(xì)胞、MC-CAR細(xì)胞 SuDHL 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Evsa T細(xì)胞、H-1876細(xì)胞、WTRL1細(xì)胞 HEC251細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL1-0細(xì)胞、IHH4細(xì)胞、MDA453細(xì)胞 H4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M1細(xì)胞、RPMI-2650細(xì)胞、SNU761細(xì)胞 H-1755細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2342細(xì)胞、COLO-680N細(xì)胞、OCI-AML-3細(xì)胞 SJSA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 12T細(xì)胞、MHCC-LM3細(xì)胞、Th17細(xì)胞 OV90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McG-1細(xì)胞、Hs 821.T細(xì)胞、PANC-03-27細(xì)胞 NCIH1568細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:THEECs細(xì)胞、118 MG細(xì)胞、RPMC細(xì)胞 TE-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GOS-3細(xì)胞、Hs 675.T細(xì)胞、SNT-8細(xì)胞 CCD-112 CoN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:266 Bl細(xì)胞、H211細(xì)胞、Panc-02細(xì)胞 OCIAML4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG10815細(xì)胞、A2780/Taxol細(xì)胞、3T3 clone A31細(xì)胞 HMEC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-sm 1細(xì)胞、PCI-4B細(xì)胞、MDA-MB-134 VI細(xì)胞 NCI-H2023細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:G-292細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5細(xì)胞、HOS (TE85)細(xì)胞 HBZY 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS-MNNG細(xì)胞、HEK-293F細(xì)胞、REC1細(xì)胞 UWB1.289細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:118MG細(xì)胞、NCIH196細(xì)胞、FD-LSC-1細(xì)胞 CCD-841CoTr Cell:人結(jié)腸癌細(xì)胞系 EFO27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2171細(xì)胞、H1417細(xì)胞、Balb/c 3T3細(xì)胞 H-1155細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:143BTK-細(xì)胞、LN 229細(xì)胞、hADSCs細(xì)胞 KPL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM2219C細(xì)胞、WC00044細(xì)胞、Hs 940.T細(xì)胞 NG108-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRAEC細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞、AA-Mel細(xì)胞 HuH6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel526細(xì)胞、LC1細(xì)胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞 HSC6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOP 92細(xì)胞、Dami細(xì)胞、SNU620細(xì)胞 NCI-H2085細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6細(xì)胞、H-7721細(xì)胞、HT55細(xì)胞 95D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCUM-1細(xì)胞、C4-2細(xì)胞、NTHY-ORI3.1細(xì)胞 OCIAML5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Leukemia 1210細(xì)胞、HS-294細(xì)胞、HEL-92-1-7細(xì)胞 H2030細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Molm14細(xì)胞、CALU1細(xì)胞、L 1210細(xì)胞 SHP-77細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG108-15細(xì)胞、COLO-679細(xì)胞、Hs-27細(xì)胞 293 Ad5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MO59J細(xì)胞、SRA 01/04細(xì)胞、NCI-SNU-1040細(xì)胞 "
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