"HEK293-FT Cell:表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:該細胞穩(wěn)定表達SV40大T抗原,并且促進最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。 NCIH1573細胞系相關產(chǎn)品:CT26細胞、KYSE50細胞、MOVAS細胞 HCT.116細胞系相關產(chǎn)品:SO-Rb 50細胞、P3-X63-Ag8-653細胞、SHSY-5Y細胞 N-Tera-2細胞系相關產(chǎn)品:RBL-2H3細胞、IEC 18細胞、PC-3M IE8細胞 NCI-H740細胞系相關產(chǎn)品:LA-N-6細胞、AM細胞、Panc_08_13細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 HEK293-FT Cell:表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞系 細胞消化過程總結(jié):其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備100%的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學那樣吹打1h,等待單細胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代 造成實驗室細胞污染常見情況總結(jié):細胞培養(yǎng)中最常見污染的是細菌、真菌和支原體污染。細胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細胞污染呢?我們根據(jù)常見細胞培養(yǎng)實驗分析總結(jié)下?!具`規(guī)操作】1)為節(jié)省時間,有人已經(jīng)用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗;2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺不點酒精燈;點了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗;4)不帶手套,徒手操作;5)細胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術器械、離心機、冰箱等專用儀器設備以及專用的實驗服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細胞使用。培養(yǎng)細胞過程中使用的所有實驗用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細胞!一不小心“飄”進你的細胞培養(yǎng)板里,細胞就會養(yǎng)的不好,啥時候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤?!緜鞔毎硕嗫陔s,難管理】在傳代細胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗在無菌條件下操作。出入試驗室,實驗服當風衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細胞污染;超凈臺做實驗時,喜歡說話聊著做試驗,要是還不帶口罩,里面就有很多細菌等著去攻擊你的細胞呢! 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 PANC 1005細胞系相關產(chǎn)品:BEP2D細胞、Psi-2-DAP細胞、JVM-3細胞 HEK293細胞系相關產(chǎn)品:U-343-MG細胞、HIMEC細胞、Murine Carcinoma-38細胞 NCI-H1048細胞系相關產(chǎn)品:TE 85.T細胞、CMT 167細胞、RAG細胞 MDA-MB157細胞系相關產(chǎn)品:hUC-MSC細胞、CZ-1細胞、SUM-102細胞 SNU368細胞系相關產(chǎn)品:NB-4細胞、GM02219細胞、Detroit562細胞 細胞生長特性:懸浮生長 HEK293-FT Cell:表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞系 貼壁細胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細胞。這種方法作用溫和,對細胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質(zhì),對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細胞的損傷比較大,但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。5、物理法。直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點是:對細胞損傷小,不需要中止或洗細胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導致大量細胞死亡操作的間充質(zhì)干細胞、DC細胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺上,很快細胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 細胞形態(tài)特性:圓形 Swiss 3T3細胞系相關產(chǎn)品:JROECL 19細胞、624細胞、HNE2細胞 MDST8細胞系相關產(chǎn)品:NCIH2286細胞、A-704細胞、MBdSMC細胞 H740細胞系相關產(chǎn)品:Neuro2a細胞、SUM-190細胞、IOSE80細胞 Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細胞系相關產(chǎn)品:U-87 MG細胞、LAN-1細胞、MeT 5A細胞 WC00044細胞系相關產(chǎn)品:HEK 293 EBNA細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞、MDA-175細胞 HEB細胞系相關產(chǎn)品:KMS26細胞、H-847細胞、EB1細胞 TB1 Lu細胞系相關產(chǎn)品:SK_HEP1細胞、P3HR-1細胞、LA-N-1細胞 HEK293-FT Cell:表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞系 CL1-0細胞系相關產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-231細胞、NCIADR.RES細胞、PK(15)細胞 NCI-H69細胞系相關產(chǎn)品:H735細胞、PL 45細胞、MHCC 97-H細胞 Centre Antoine Lacassagne-78細胞系相關產(chǎn)品:H-548細胞、LNT-229細胞、NTERA2-cloneD1細胞 KS-1 [Human glioblastoma]細胞系相關產(chǎn)品:BEL 7405細胞、BC-021細胞、TE-7細胞 C57 Mouse Tumor 93細胞系相關產(chǎn)品:Ramos(RA1)細胞、HeLa-229細胞、Sf21細胞 JROECL 33細胞系相關產(chǎn)品:HOCF細胞、BHK細胞、C3H10T1/2CL8細胞 SK MES 1細胞系相關產(chǎn)品:OVCAR.3細胞、D-283MED細胞、LNCaP C4-2細胞 BV2細胞系相關產(chǎn)品:KYSE 520細胞、HCC-2108細胞、SKG3A細胞 HCC1588細胞系相關產(chǎn)品:H-211細胞、MDA-kb2細胞、H-3255細胞 HCC1588細胞系相關產(chǎn)品:H-211細胞、MDA-kb2細胞、H-3255細胞 WEHI 3細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H292細胞、Hs27F細胞、Clone 15 HL-60細胞 MIA Paca2細胞系相關產(chǎn)品:HUT-28細胞、rRTEC細胞、BL2141細胞 PFSK1細胞系相關產(chǎn)品:DC 2.4細胞、Hs-274-T細胞、TK 10細胞 Laboratory of Allergic Diseases 2細胞系相關產(chǎn)品:SU-DHL-1細胞、Hep 3B2_1-7細胞、GM-215細胞 AM細胞系相關產(chǎn)品:HFLS-RA細胞、GLC-15細胞、HO1N1細胞 BSC-1細胞系相關產(chǎn)品:COV 504細胞、Tn5B1-4細胞、RBMVEC細胞 CMT 64細胞系相關產(chǎn)品:TGBC11T細胞、M20 [Human melanoma]細胞、NEC8細胞 Medical Research Council cell strain-5細胞系相關產(chǎn)品:SupT1細胞、G 292 Clone A 141B1細胞、IR983F細胞 2PK3細胞系相關產(chǎn)品:NIH 3T6細胞、Lewis-Lung細胞、NTERA2D1細胞 ASPC1細胞系相關產(chǎn)品:HT-144細胞、TE671/RD細胞、MFM223細胞 Lu-99A細胞系相關產(chǎn)品:P3X63 Ag8細胞、HPAF II細胞、CHO K1細胞 Lu-99A細胞系相關產(chǎn)品:P3X63 Ag8細胞、HPAF II細胞、CHO K1細胞 EC-9706細胞系相關產(chǎn)品:LTEP-s細胞、BaF3細胞、G292細胞 ATDC-5細胞系相關產(chǎn)品:KMST-6細胞、OVCAR-3細胞、MBMEC細胞 ZR7530細胞系相關產(chǎn)品:Caco2-BBE細胞、293-F細胞、H-1092細胞 COLO-738細胞系相關產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 1846細胞、M3 Clone M-3細胞、GM05862細胞 H-7721細胞系相關產(chǎn)品:TSU-Pr1細胞、TGBC-11-TKB細胞、HEp-2細胞 SK HEP 01細胞系相關產(chǎn)品:HcaF細胞、Wien-133細胞、CAMA-1細胞 TE6細胞系相關產(chǎn)品:MEF細胞、Hs 274.T細胞、DLM8細胞 H-1437細胞系相關產(chǎn)品:H-64細胞、L02細胞、PA-TU S細胞 SNU-119細胞系相關產(chǎn)品:HL7702細胞、IBRS2細胞、PaCa2細胞 HuH-28細胞系相關產(chǎn)品:MCCAR細胞、Hs934T細胞、Jurkat, Clone E6-1細胞 CCK-81細胞系相關產(chǎn)品:H6c7細胞、MA-c細胞、Mouse Colon 38細胞 FaDu細胞系相關產(chǎn)品:Farage細胞、D-407細胞、SK-MES-1細胞 KYSE 70細胞系相關產(chǎn)品:REC細胞、Pt-K1細胞、Kit225-K6細胞 293 c18細胞系相關產(chǎn)品:NCI-SNU-668細胞、HPAF-I細胞、A431/P細胞 WTRL1細胞系相關產(chǎn)品:AAV-293細胞、H-920細胞、DanG細胞 MeT 5A細胞系相關產(chǎn)品:SW1783細胞、IPI-2I細胞、Panc 02.03細胞 OV3121細胞系相關產(chǎn)品:BCP-1細胞、NCI-BL1339細胞、Hs294細胞 Jiyoye(P-2003)細胞系相關產(chǎn)品:Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞、ECC1細胞、Tb 1 Lu (NBL-12)細胞 OV90細胞系相關產(chǎn)品:McG-1細胞、Hs 821.T細胞、PANC-03-27細胞 HGMC細胞系相關產(chǎn)品:MFE 296細胞、DSL-6A/C1細胞、OVCAR-8細胞 NCI-H2170細胞系相關產(chǎn)品:Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2細胞、BHT101細胞、COLO-824細胞 HEK293-FT Cell:表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞系 HSC6細胞系相關產(chǎn)品:HOP 92細胞、Dami細胞、SNU620細胞 SK-MEL-2-LUC細胞系相關產(chǎn)品:VE細胞、CORL105細胞、B16-F10細胞 GC-2spd(ts)細胞系相關產(chǎn)品:Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細胞、TMD8細胞、SKNBE-1細胞 MIN6細胞系相關產(chǎn)品:NCIH1568細胞、10RGB細胞、LS 123細胞 MRC 5細胞系相關產(chǎn)品:BE2-C細胞、PE CA PJ34細胞、RC-4B細胞 H-1793細胞系相關產(chǎn)品:ECC-10細胞、Swiss 3T6細胞、SCC-25細胞 SK UT 1細胞系相關產(chǎn)品:SNU216細胞、HD11細胞、MN60細胞 MRAEC細胞系相關產(chǎn)品:LNCaP C4-2B細胞、LS-123細胞、RAMSCs細胞 HT55細胞系相關產(chǎn)品:SUM 159PT細胞、UM-UC-14細胞、ML-2細胞 SBC-5細胞系相關產(chǎn)品:SACC-LM細胞、Soleus clone 8細胞、253J-Bladder-V細胞 Tokyo Medical and Dental university 8細胞系相關產(chǎn)品:CEK細胞、HB 611細胞、FLC-7細胞 NCIH1993細胞系相關產(chǎn)品:3AA細胞、NCIH2110細胞、NG-108-15細胞 "
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