"THLE-3 Cell:人肝永生化細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 J-774A.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-CCRF細(xì)胞、OCI-Ly 19細(xì)胞、PC12(高分化)細(xì)胞 RM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ChaGo K-1細(xì)胞、HOP-92細(xì)胞、159PT細(xì)胞 CCRF/CEM/0細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9c2(2-1)細(xì)胞、HCC-1419細(xì)胞、H661細(xì)胞 NL-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RERF-LC-MS細(xì)胞、9L細(xì)胞、Hs832.Tc細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 THLE-3 Cell:人肝永生化細(xì)胞系 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實絕大部分細(xì)胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性,無論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動,就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 GM03571細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Fetal Rhesus Kidney-4細(xì)胞、HCC-1395細(xì)胞、SU86.86細(xì)胞 B16 melanoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:As-PC1細(xì)胞、End1/E6E7細(xì)胞、H889細(xì)胞 HLEB3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH 7777細(xì)胞、2780CP細(xì)胞、NRK-52E細(xì)胞 H-650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LCLC103H細(xì)胞、ARO 81-1細(xì)胞、AtT 20細(xì)胞 HPAF-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM.12細(xì)胞、HC11 Mammary Epithelium細(xì)胞、Hs 832(C).T細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 THLE-3 Cell:人肝永生化細(xì)胞系 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項:細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時收獲細(xì)胞,計數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實,細(xì)胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 U-373 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-132細(xì)胞、Huh7.5.1細(xì)胞、GS9L細(xì)胞 NCI-SNU-761細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293細(xì)胞、KM12細(xì)胞、SNU-182細(xì)胞 H-1688細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA330細(xì)胞、LLC-PK-1細(xì)胞、Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1細(xì)胞 PL45細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:4T1細(xì)胞、NHDF細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-12T細(xì)胞 SKRC20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C32 mel細(xì)胞、SV40-HCEC細(xì)胞、CCD-112CoN細(xì)胞 HR1K細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB6 Cl 30-7b細(xì)胞、TM-4細(xì)胞、IB-RS2細(xì)胞 H-2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK;293細(xì)胞、KM932細(xì)胞、HS578細(xì)胞 THLE-3 Cell:人肝永生化細(xì)胞系 H-2170細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WILL-2細(xì)胞、Y-79細(xì)胞、RN-c細(xì)胞 KBM7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C3A細(xì)胞、MDA-MB-231-luc細(xì)胞、HS-766-T細(xì)胞 NIH/3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAPC2B細(xì)胞、MDA-MB 468細(xì)胞、MX-1細(xì)胞 HEK-293-H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LK-2細(xì)胞、Reh細(xì)胞、SHG 44細(xì)胞 NBL-12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PT-K75細(xì)胞、GM-637細(xì)胞、WI 38細(xì)胞 Meat Animal Research Center-145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hu-P-T3細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞、CCD-841-CoN細(xì)胞 SO-Rb 50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293/EBNA細(xì)胞、H-1385細(xì)胞、RASMC細(xì)胞 LS411細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2195細(xì)胞、NCI-H1668細(xì)胞、HCC1954細(xì)胞 UO31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHH-CALL-2細(xì)胞、MV-4:11細(xì)胞、293 HEK細(xì)胞 HCGC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC3H-1細(xì)胞、PG-BE1細(xì)胞、OCUM-1細(xì)胞 UMC11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-373-MG細(xì)胞、KRC/Y細(xì)胞、NTERA-2 cl.D1細(xì)胞 PC3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK-2細(xì)胞、NCI-H1770細(xì)胞、NUGC3細(xì)胞 NCI-HUT-292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2291細(xì)胞、H322T細(xì)胞、SUDHL4細(xì)胞 NCI-H211細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H22細(xì)胞、JG細(xì)胞、P3 (Jiyoye)細(xì)胞 NCI-H2330細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 403細(xì)胞、NCI-H820細(xì)胞、MFC細(xì)胞 MH-22a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:High-5細(xì)胞、NCI-H2286細(xì)胞、P3-NS1/1Ag 4.1細(xì)胞 MDA-435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GA-10 (Clone 4)細(xì)胞、SK-RC-20細(xì)胞、F-36P細(xì)胞 H-660細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63細(xì)胞、WM266mel細(xì)胞、Y3-Ag123細(xì)胞 COV504細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H341細(xì)胞、Rh30細(xì)胞、Hs 27細(xì)胞 V 79-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHs 74 Int細(xì)胞、K 562細(xì)胞、AU-565細(xì)胞 FHCRC-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Metastatic Variant-522細(xì)胞、SupT1細(xì)胞、NCI-H2227細(xì)胞 MDA-MB-134-VI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB436細(xì)胞、TGW-nu細(xì)胞、RAOEC細(xì)胞 SUM 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