異硫氰酸胍
異硫氰酸胍
CAS: 593-84-0
別名:硫氰酸胍
聯(lián)系電話:027-87738695/15387162512 QQ:664219562 付經(jīng)理
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Guandine throcyanate 簡(jiǎn)稱 GITC
分子式:CH5N3·HSCN 分子量:118.16
外觀:白色結(jié)晶 熔點(diǎn):115-120℃ PH(4%水溶液):4.5-7.0
紫外吸收(300nm,6M):≤0.1 abs unit
紫外吸收(410nm,6M):≤0.05abs unit
干燥失重:≤0.5%
用途:用于變性裂解細(xì)胞;提取RNA和DNA。無(wú)RNA酶和DNA酶活性 TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑,可以直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞并抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。
異硫氰酸胍法提取同時(shí)提取DNA病毒和RNA病毒核酸
隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展,基因診斷成為檢測(cè)動(dòng)物疫病最準(zhǔn)確而有效地手段,進(jìn)行基因診斷的過(guò)程中,病毒核酸的提取是進(jìn)行檢測(cè)的前提條件,核酸提取的質(zhì)量也影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
當(dāng)前,動(dòng)物病毒核酸提取方法主要有經(jīng)典Trizol提取法和以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法兩種方法。經(jīng)典Trizol提取法過(guò)程繁瑣、周期長(zhǎng)、提取效率低、技術(shù)要求高,以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法成本較高、提取RNA的質(zhì)量不高、且只能提取RNA病毒。
一種同時(shí)提取血清、雙拭子中動(dòng)物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法,包括步驟:對(duì)待提取物使用異硫氰酸胍裂解液裂解;硅膠膜吸附RNA;洗液Ⅰ除去雜蛋白;洗液Ⅱ洗去雜質(zhì);DEPC水洗脫核 酸;上述異硫氰酸胍裂解液包括3-7M異硫氰酸胍、0.6%-1.0%TriTon-100、30-50mM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA,PH在4.3-4.6。
上述洗液Ⅰ包括5-6M鹽酸胍,53-59%無(wú)水乙醇,K70-90μg/mL蛋白酶,PH在6.4-6.6;上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。
進(jìn)一步地,上述異硫氰酸胍裂解液包括5M異硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA,pH在4.5。進(jìn)一步地,上述洗液Ⅰ包括5.5M鹽酸胍,56%無(wú)水乙醇,80μg/mL蛋白酶K,PH在6.5。進(jìn)一步地,上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。
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