Takara的pCold TF載體是一種融合表達(dá)可溶性的標(biāo)簽"觸發(fā)因子(Trigger Factor,TF)伴侶"的冷休克載體。"觸發(fā)因子"(48KD)是原核核糖體相關(guān)的分子伴侶蛋白(48 kDa),有利于新表達(dá)的多肽的共翻譯折疊。正因?yàn)樗鼇?lái)源于大腸桿菌,保證了觸發(fā)因子能夠在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中高表達(dá)。 pCold TF載體由CSPA啟動(dòng)子及其下游的序列組成,其下游序列主要包括包括5'非翻譯區(qū)(5'非編碼區(qū)),翻譯增強(qiáng)元件(TEE),His標(biāo)簽序列,多克隆位點(diǎn)(MCS)。Lac操縱子插入在CSPA啟動(dòng)子下游,以確保嚴(yán)格的表達(dá)調(diào)控。此外,HRV 3C蛋白酶,凝血酶,和Factor Xa識(shí)別位點(diǎn)位于“Trigger Factor”和多克隆位點(diǎn)(MCS)之間,以便表達(dá)的融合蛋白上將標(biāo)簽去除。 大多數(shù)大腸桿菌菌株都可以可以作為本載體的表達(dá)宿主。pCold TF載體提供冷休克誘導(dǎo)的方法高水平表達(dá)目的蛋白,再加上觸發(fā)因子(伴侶)的表達(dá)來(lái)提高正確的蛋白質(zhì)折疊,從而實(shí)現(xiàn)高效可溶性表達(dá)其他系統(tǒng)中難以對(duì)付的蛋白。
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