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天冬染料法PCR鑒定試劑盒,Radix asparagi
  • 天冬染料法PCR鑒定試劑盒,Radix asparagi

天冬染料法PCR鑒定試劑盒

價(jià)格 2490
包裝 50T
最小起訂量 50T
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:天冬染料法PCR鑒定試劑盒英文名稱:Radix asparagi
保存條件: -20℃以下,有效期12個(gè)月。純度規(guī)格: 99%
產(chǎn)品類別: 染料法熒光定量PCR試劑盒
2024-12-25 天冬染料法PCR鑒定試劑盒 Radix asparagi 50T/2490RMB 2490 -20℃以下,有效期12個(gè)月。 99% 染料法熒光定量PCR試劑盒

天冬染料法PCR鑒定試劑盒

Radix asparagi

它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據(jù)天冬保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

 

規(guī)格及成分

成分

編號(hào)

十孔盒包裝

2×qPCR MagicMix

A

500μL(棕色管)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

B

1 mL(黃蓋)

天冬PCR 引物混合物

C

100μL(白蓋)

天冬 PCR 陽性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL)

D

50μL(紅蓋)

DNA 病毒裂解液(試用裝)

E

15 次(9 mL)

使用手冊(cè)

F

1 份


儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。

使用方法:

一、樣品采集:

1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。

3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

 注:上述樣品建議經(jīng)過增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。

二、DNA提取:
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 注:陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高,建議最后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

檢測(cè)步驟:
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)

10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)

樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):

成分

樣品管

N+2 個(gè)

PCR 陰性

對(duì)照管

PCR 陽性

對(duì)照管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

天冬 PCR

引物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

各2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 待測(cè)樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

第 7 步所得 PCR 陽性對(duì)照稀釋液(2-7 號(hào))

不加

不加

各 6μL(2 號(hào)樣到

2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3

號(hào)管…)

注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,其他熒光PCR儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。

蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

2.qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:

 

1循環(huán)

50℃ for 2 min

預(yù)變性

1循環(huán)

95℃ for 10min

PCR擴(kuò)增

40循環(huán)

95℃ for 15s
60℃ for 60s


在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM

四、結(jié)果分析:
1.結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2.試驗(yàn)成立判定
1)陰性對(duì)照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。 
2)陽性對(duì)照(ESKZ -PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線,且Ct值≤35。
3)以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則,此次試驗(yàn)視為無效。
3.結(jié)果判定
1)在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽性,表明阪崎腸桿菌核酸陽性。
2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明阪崎腸桿菌核酸陰性。
3)如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
4)對(duì)于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行阪崎腸桿菌real time PCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽性,表明阪崎腸桿菌核酸陽性;否則判為樣本陰性。

五、注意事項(xiàng):
1)初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
2)所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
3)PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

關(guān)鍵字: 天冬染料法PCR鑒定試劑盒廠家;天冬染料法PCR鑒定試劑盒價(jià)格;天冬染料法PCR鑒定試劑盒說明書

公司簡(jiǎn)介

上海澤葉生物科技有限公司是一家服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè),主要為科研機(jī)構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開發(fā)研究提供所需要的科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、材料科學(xué),通用試劑、藥物合成試劑、手性化合物、催化劑及配體、分析試劑、生物試劑,檢測(cè)試劑等等
成立日期 2016-08-08 (9年) 注冊(cè)資本 100萬元整
員工人數(shù) 1-10人 年?duì)I業(yè)額 ¥ 100萬以內(nèi)
主營行業(yè) 生物化工,有機(jī)原料,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料,技術(shù)服務(wù) 經(jīng)營模式 貿(mào)易,試劑,定制,服務(wù)
  • 上海澤葉生物科技有限公司
VIP 6年
  • 公司成立:9年
  • 注冊(cè)資本:100萬元整
  • 企業(yè)類型:貿(mào)易
  • 主營產(chǎn)品:主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒、重組蛋白、抗體、生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)等科研用品
  • 公司地址:松江區(qū)新橋鎮(zhèn)賣新公里2077號(hào)8309室
詢盤

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