RNAeasy™動(dòng)物RNA抽提試劑盒(離心柱式)
的離心柱式RNAeasy™動(dòng)物RNA抽提試劑盒(RNAeasy™ Animal RNA Isolation Kit with Spin Column)是一種基于離心柱法從動(dòng)物組織或培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞中安全、快速、便捷、穩(wěn)定、高效、高質(zhì)量地抽提長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸(nucleotide, nt)的RNA的試劑盒。抽提獲得的大于200個(gè)核苷酸的RNA(也常被稱為總RNA)可以用于各種常規(guī)用途。
本試劑盒抽提得到的RNA可用于反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、qPCR、Northern、點(diǎn)雜交(Dot Blot)、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆等下游實(shí)驗(yàn);也可用于基因表達(dá)芯片分析(microarray)、高通量測(cè)序(high throughput
sequencing)等對(duì)RNA質(zhì)量要求較高的情況。
信裕生物的三款離心柱式及Trizol法RNA抽提試劑盒的主要特點(diǎn)和差異如下:
產(chǎn)品編號(hào)
R0024/ R0026/ R0027
R0028
R0032
R0011/R0016
產(chǎn)品名稱
RNAeasy™動(dòng)物RNA
抽提試劑盒
RNAeasy™動(dòng)物小RNA
抽提試劑盒
RNAeasy™ Plus動(dòng)物RNA
抽提試劑盒
Beyozol Trizol
推薦指數(shù)
★★★★★
★★★★★
★★★
★★
抽提產(chǎn)物
RNA(>200nt)
小RNA(<200nt)
總RNA(含<200nt的小RNA)
總RNA(含<200nt的小RNA)
操作時(shí)間
最短(15-20分鐘)
稍較長(zhǎng)(20-25分鐘)
較長(zhǎng)(25-30分鐘)
最長(zhǎng)(45-60分鐘)
操作步驟
4步驟(少)
6步驟(多)
6步驟(多)
很多步驟
推薦細(xì)胞量/得率
50-100萬(wàn)/5-20μg
50萬(wàn)/1-2μg
50-100萬(wàn)/5-20μg
50-100萬(wàn)/5-20μg
推薦組織量/得率
5-20mg/10-40μg (多)
5mg/1-1.5μg (少)
3-5mg/3-10μg (少)
50mg/100-500μg (很多)
有毒有害試劑
無(wú)
無(wú)
無(wú)
有
國(guó)外同類產(chǎn)品
RNeasy Mini Kit (Qiagen)
PureLink® RNA Mini Kit
(Thermo)
PureLink® miRNA Isolation Kit (Thermo)
miRNeasy Mini Kit (Qiagen)
TRIzol (Thermo)
用途
非小RNA相關(guān)各種用途
小RNA相關(guān)各種用途
不同長(zhǎng)度RNA各種用途
不同長(zhǎng)度RNA各種用途
動(dòng)物組織或細(xì)胞中的RNA按照長(zhǎng)度可以分為長(zhǎng)鏈RNA(long RNA)和小RNA(small RNA),長(zhǎng)鏈RNA通常大于200nt,而小RNA通常小于200nt。長(zhǎng)鏈RNA按照是否編碼蛋白或多肽可以分為長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非編碼的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。
本試劑盒抽提RNA的基本流程如圖1所示。樣品在裂解液中迅速裂解,釋放出總RNA,然后讓RNA特異性地結(jié)合到純化柱上,而基因組DNA和蛋白質(zhì)等其它組分通過高速離心被有效去除,再通過3次洗滌充分去除非特異性結(jié)合的蛋白、鹽等雜質(zhì),最后用洗脫液將高純度的RNA洗脫下來(lái)。
圖1. 離心柱式RNA抽提流程示意圖
本試劑盒使用安全。本試劑盒通過特殊的柱純化介質(zhì)進(jìn)行RNA分離純化,能有效避免傳統(tǒng)的Trizol法抽提時(shí)使用的酚、氯仿等有毒有害有機(jī)試劑。
本試劑盒使用快速、便捷。本試劑盒采用柱純化,無(wú)需繁瑣的RNA沉淀步驟,抽提操作過程僅15-20分鐘。相比于傳統(tǒng)的Trizol抽提法,本試劑盒的操作流程顯著簡(jiǎn)化,縮短了抽提時(shí)間,降低了RNA被降解的風(fēng)險(xiǎn)。和國(guó)外同類柱純化產(chǎn)品相比,所需操作步驟和操作時(shí)間基本一致。
本試劑盒抽提RNA的得率高,優(yōu)于國(guó)外同類產(chǎn)品。本試劑盒的抽提效果經(jīng)反復(fù)測(cè)試,100萬(wàn)個(gè)HeLa細(xì)胞能抽提得到約15-20μgRNA,20mg小鼠肝組織能抽提得到約25-35μgRNA,20mg小鼠腦組織中抽提得到約10-20μgRNA(新鮮樣品的得率高于凍存樣品)。本試劑盒與傳統(tǒng)的Trizol方法及國(guó)際知名Q品牌同類產(chǎn)品的抽提效果對(duì)比參見圖2。
本試劑盒抽提得到的RNA純度高,顯著優(yōu)于Trizol和國(guó)外Q品牌的同類產(chǎn)品。本試劑盒抽提得到的RNA的A260/A280通常為2.0-2.2。A260/A230通常為1.9-2.1。本試劑盒與傳統(tǒng)的Trizol方法及國(guó)際知名Q品牌同類產(chǎn)品的抽提效果對(duì)比參見圖2。由圖2可知,本試劑盒在抽提組織樣品的RNA時(shí),A260/A230非常顯著地高于Trizol法和Q品牌的同類產(chǎn)品,提示純度高。
圖2. 本試劑盒與Trizol、Q品牌同類產(chǎn)品的RNA抽提效果對(duì)比。樣品為凍存的50萬(wàn)個(gè)HeLa細(xì)胞、20mg小鼠肝組織和20mg小鼠腦組織。洗脫液用量均為40μl。均取6μl洗脫的樣品經(jīng)變性處理后,在含6.67%甲醛和適量NA-Red的1.2%變性瓊脂糖凝膠中電泳約45分鐘后拍照。實(shí)際抽提效果會(huì)因?qū)嶒?yàn)條件、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異,本圖僅供參考。
注:純的RNA其A260/A280約為2.0,但在很多儀器上測(cè)定時(shí)會(huì)高于2.0,低于1.9通常認(rèn)為有蛋白、DNA或者酚等的污染;純的RNA其A260/A230約為2.0左右或者略高,低于1.9通常認(rèn)為有碳水化合物、胍鹽、多肽或酚等的污染。
本產(chǎn)品與Qiagen公司的RNeasy Mini Kit一致,用于純化200nt以上的RNA,對(duì)小于200nt的small RNA即小RNA(如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、miRNA、piRNA等)被選擇性地去除,如果希望抽提得到小于200nt的小RNA,推薦使用信裕生物的
RNAeasy™動(dòng)物小RNA抽提試劑盒(離心柱式)(R0028)或RNAeasy™ Plus動(dòng)物RNA抽提試劑盒(離心柱式)(R0032)。
本試劑盒適用于新鮮或凍存的動(dòng)物組織或細(xì)胞RNA的抽提,推薦的細(xì)胞用量為50-100萬(wàn)(上限可達(dá)1000萬(wàn)),組織用量為15-20mg(上限可達(dá)30mg)。對(duì)于不同的組織或細(xì)胞上限會(huì)有所差別,例如小鼠肝臟組織的上限可達(dá)30mg,但肌肉組織的上限為20mg。
本試劑盒可用于12個(gè)樣品的RNA抽提。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
室溫保存,一年有效。
注意事項(xiàng):
對(duì)于富含RNase的樣品(如動(dòng)物組織),建議使用前在裂解液中添加二硫蘇糖醇(Dithiothreitol, DTT)至終濃度為40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巰基乙醇至終濃度為1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巰基乙醇)。含DTT或β-巰基乙醇的裂解液可在室溫放置1個(gè)月。
通過本試劑盒抽提到的RNA已經(jīng)去除絕大多數(shù)DNA,通常情況無(wú)需DNase處理。后續(xù)如進(jìn)行某些對(duì)極少量DNA殘留較敏感的實(shí)驗(yàn)時(shí),可以在使用說明中步驟4離心后,在純化柱中加入適量DNase I (如80μl含10U DNase I的酶溶液,推薦使用信裕生物的DNase I,D7076),室溫消化15分鐘。消化結(jié)束后,不要離心,直接加入500μl洗滌液II,進(jìn)入使用說明的步驟5進(jìn)行操作。
本試劑盒提供的所有試劑和耗材都是RNase-free,操作時(shí)應(yīng)小心,避免被污染。所有自行準(zhǔn)備的試劑和耗材也都應(yīng)是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,然后高溫高壓滅菌并烘干。操作時(shí)應(yīng)避免對(duì)著樣品或所使用的試劑盒耗材呼氣或說話,以防RNase污染。建議戴一次性口罩操作。
對(duì)于操作環(huán)境中RNA酶的去除,推薦使用信裕生物生產(chǎn)的RNase and DNase Away (R0123)以去除實(shí)驗(yàn)桌面上或其它接觸面上的RNase。
使用凍存的細(xì)胞或組織抽提RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來(lái)并剪切樣品中的RNA。對(duì)于組織樣品,推薦使用信裕生物生產(chǎn)的RNALater™動(dòng)物組織RNA穩(wěn)定保存液(R0118)進(jìn)行保存以保證樣品RNA的完整性。
本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行,操作時(shí)無(wú)需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
結(jié)合液、洗滌液中含有乙醇,使用后須旋緊瓶蓋以防揮發(fā),并須按照易燃試劑的相關(guān)規(guī)范進(jìn)行存放和使用。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1. 樣品的準(zhǔn)備。
細(xì)胞樣品:收集50-100萬(wàn)左右的細(xì)胞。對(duì)于懸浮細(xì)胞,1000-2000g離心1分鐘后棄上清,加入300μl裂解液,輕輕吹打8-10次至固懸物溶解、溶液澄清;對(duì)于貼壁細(xì)胞,吸凈培養(yǎng)液后加入300μl裂解液,輕輕吹打5-10次至固懸物溶解、溶液澄清,轉(zhuǎn)移至一潔凈離心管內(nèi)。
組織樣品:取15-20mg動(dòng)物組織,置于液氮中研磨成粉末,立即加入600μl裂解液。也可將組織置于1.5ml離心管中,迅速加入600μl冰浴預(yù)冷的裂解液,用微型電動(dòng)勻漿器勻漿,或者用普通玻璃勻漿器進(jìn)行勻漿。研磨或勻漿后,輕輕吹打勻漿液8-10次,室溫放置3-5分鐘。然后約14,000g離心2分鐘,將上清液移至新的離心管中。對(duì)于比較容易裂解且勻漿很充分的組織(如肝組織、腦組織等)可以不用高速離心而直接進(jìn)入步驟2。
注意:細(xì)胞的數(shù)量一般不超過500萬(wàn),不超過100萬(wàn)細(xì)胞宜使用300μl裂解液,多于100萬(wàn)細(xì)胞宜使用600μl裂解液。動(dòng)物組織的用量一般不超過30mg,用量過多可能會(huì)因裂解不充分導(dǎo)致得率下降。組織樣品在裂解和離心后,離心管下部可能會(huì)有一些膠狀物質(zhì),宜作為上清轉(zhuǎn)移至下一步操作。如果棄除膠狀物,會(huì)導(dǎo)致得率下降約30-50%。后續(xù)加入結(jié)合液后膠狀物會(huì)消失。離心是為了去除未勻漿充分的明顯塊狀物。如果裂解后仍有粘稠物,需增加吹打次數(shù)至溶液完全澄清。對(duì)于富含RNase的樣品,裂解液中宜添加DTT至終濃度為40mM或添加β-巰基乙醇至終濃度為1%。
2. 加入等體積結(jié)合液至裂解液中,輕輕顛倒混勻3-5次。此時(shí)可能會(huì)有沉淀物產(chǎn)生,屬于正?,F(xiàn)象。
3. 將混合物(包括沉淀物)轉(zhuǎn)移至純化柱內(nèi),12,000g離心30秒,倒棄收集管內(nèi)液體。
注意:當(dāng)裂解液的體積大于300μl時(shí),在加入等體積結(jié)合液后,總體積會(huì)超過純化柱的容量,這時(shí)應(yīng)分成2次過柱,即將一半的混合物過柱后,再將剩余的混合物重復(fù)步驟3一次。對(duì)于一些特殊的樣品,如出現(xiàn)溶液未完全通過時(shí),可延長(zhǎng)離心時(shí)間至1-2分鐘,或者加大離心力至16,000g。對(duì)于一些能快速啟動(dòng)達(dá)到12,000g的離心機(jī),離心30秒已經(jīng)足夠,對(duì)于一些啟動(dòng)速度緩慢的離心機(jī)本步驟及后續(xù)步驟中的30秒離心宜調(diào)整為60秒。
4. 加入600μl洗滌液I,12,000g離心30秒,倒棄收集管內(nèi)液體。
5. 加入600μl洗滌液II,12,000g離心30秒,倒棄收集管內(nèi)液體。
6. 重復(fù)步驟5一次。
7. 最高速(約14,000-16,000g)離心2分鐘,去除殘留的液體。
8. 將RNA純化柱置于本試劑盒提供的RNA洗脫管中,加入30-50μl洗脫液,室溫放置2-3分鐘,最高速離心30秒,所得溶液即為純化的RNA。
注意:洗脫液需要加到純化柱柱面中央,使其被完全吸收。如需獲得更高濃度的樣品,可把洗脫液的體積減小至20μl,但洗脫下來(lái)的RNA量會(huì)相對(duì)減少。室溫較低時(shí),洗脫液在37℃預(yù)熱片刻對(duì)得率有所幫助。此外,洗脫后的溶液再次加回到原純化柱再離心洗脫一次,可提高得率約10-30%;或者在次洗脫后使用新的洗脫液再洗脫一次,會(huì)獲得約為次洗脫量15-40%的RNA。
關(guān)鍵字: RNAeasy?動(dòng)物RNA抽提試劑盒(離心柱式)說明書;RNAeasy?動(dòng)物RNA抽提試劑盒(離心柱式)廠家
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品。總部位于上海,并在北京、廣東,江西,吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。