NheI

NheI內(nèi)切酶為進(jìn)口分裝，基本信息如下：

根據(jù)識別序列鄰近序列的不同，酶切效果受GC methylase導(dǎo)致的DNA甲基化的影響。
酶儲存液組成為：10mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.2mg/ml BSA and 50% glycerol。
1X Buffer Y組成為：33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassium acetate，0.1mg/ml BSA。
酶切和連接效率：50倍過量的本內(nèi)切酶消化1小時，>95%被酶切的片段可以被連接并被重新酶切(recut)。
活性單位定義：在37℃，50微升反應(yīng)體系中反應(yīng)1小時，將1微克的λDNA完全分解的酶量定義為1個活性單位，即1U。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項： 
內(nèi)切酶使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
如果發(fā)現(xiàn)預(yù)期的酶切位點不能切開，請確認(rèn)是否存在甲基化干擾問題。
特別注意：甘油含量大于5%，低鹽濃度，pH >8.0或酶大大過量(約20倍以上)可能會導(dǎo)致星號活性，即產(chǎn)生非特異性酶切。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 單酶切時可以參考如下反應(yīng)體系進(jìn)行：

說明：請注意把Buffer和水等充分混勻后再加入內(nèi)切酶，加入內(nèi)切酶后可以用槍吹打或輕輕Vortex混勻。通常參考上述條件孵育1小時已經(jīng)足夠，但多孵育數(shù)小時甚至孵育過夜也不會產(chǎn)生負(fù)面影響。如果酶切較長時間甚至酶切過夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量較大時，可以適當(dāng)延長酶切時間或按比例放大酶切體系。
2. 雙酶切或多酶切時，需選擇適當(dāng)?shù)目梢约嫒輧蓚€或多個內(nèi)切酶的緩沖液，然后參考上表設(shè)置反應(yīng)體系。如果沒有合適的緩沖液可以選擇，可以在一種酶消化完畢后進(jìn)行純化，純化完畢后再進(jìn)行另外一種酶切反應(yīng)。