中文名稱:丙酸蛛網(wǎng)菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱:Arachnia propionica |
保存條件: -20℃以下,有效期12個(gè)月。 | 純度規(guī)格: 99% |
產(chǎn)品類別: 染料法熒光定量PCR試劑盒 |
Arachnia propionica
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)丙酸蛛網(wǎng)菌保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
規(guī)格及成分
成分
編號(hào)
十孔盒包裝
2×qPCR MagicMix
A
500μL(棕色管)
熒光 PCR 專用模板稀釋液
B
1 mL(黃蓋)
丙酸蛛網(wǎng)菌PCR 引物混合物
C
100μL(白蓋)
丙酸蛛網(wǎng)菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL)
D
50μL(紅蓋)
DNA 病毒裂解液(試用裝)
E
15 次(9 mL)
使用手冊(cè)
F
1 份
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
注:上述樣品建議經(jīng)過(guò)增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。
二、DNA提?。?/strong>
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說(shuō)明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無(wú)菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注:陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高,建議最后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。
檢測(cè)步驟:
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)
樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):
成分
樣品管
N+2 個(gè)
PCR 陰性
對(duì)照管
PCR 陽(yáng)性
對(duì)照管(2-7 管)
2×qPCR MagicMix
(棕色管)
10 μL
10 μL
各 10 μL
丙酸蛛網(wǎng)菌 PCR
引物混合液(白蓋)
2 μL
2 μL
各2 μL
自備 10×ROX (見(jiàn)注)
2 μL
2 μL
2 μL
N+2 待測(cè)樣品 DNA 模板
6 μL
不加
不加
第 7 步所得 PCR 陽(yáng)性對(duì)照稀釋液(2-7 號(hào))
不加
不加
各 6μL(2 號(hào)樣到
2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3
號(hào)管…)
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,其他熒光PCR儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。
蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。
2.qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán)
50℃ for 2 min
預(yù)變性
1循環(huán)
95℃ for 10min
PCR擴(kuò)增
40循環(huán)
95℃ for 15s
60℃ for 60s
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM
四、結(jié)果分析:
1.結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2.試驗(yàn)成立判定
1)陰性對(duì)照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
2)陽(yáng)性對(duì)照(ESKZ -PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線,且Ct值≤35。
3)以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則,此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
3.結(jié)果判定
1)在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性,表明阪崎腸桿菌核酸陽(yáng)性。
2)Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本,表明阪崎腸桿菌核酸陰性。
3)如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽(yáng)性,否則判為陰性。
4)對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行阪崎腸桿菌real time PCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽(yáng)性,表明阪崎腸桿菌核酸陽(yáng)性;否則判為樣本陰性。
五、注意事項(xiàng):
1)初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作。
2)所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
3)PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
成立日期 | 2016-08-08 (9年) | 注冊(cè)資本 | 100萬(wàn)元整 |
員工人數(shù) | 1-10人 | 年?duì)I業(yè)額 | ¥ 100萬(wàn)以內(nèi) |
主營(yíng)行業(yè) | 生物化工,有機(jī)原料,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料,技術(shù)服務(wù) | 經(jīng)營(yíng)模式 | 貿(mào)易,試劑,定制,服務(wù) |
產(chǎn)品名稱 | 價(jià)格 | 公司名稱 | 報(bào)價(jià)日期 | |
---|---|---|---|---|
¥3490 |
VIP1年
|
上海晶風(fēng)生物科技有限公司
|
2024-12-25 | |
¥1490 |
VIP6年
|
上??道噬锟萍加邢薰?/div>
|
2024-12-24 | |
¥3980 |
VIP3年
|
上海雅吉生物科技有限公司
|
2024-12-24 |