超快蛋白銀染試劑盒
產(chǎn)品及特點蛋白質(zhì)銀染的原理是銀離子(Ag+)可與蛋白質(zhì)等大分子有機物形成穩(wěn)定的復(fù)合物,然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使 Ag+還原成銀顆粒,可把蛋白電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色,其靈敏度比考馬斯亮藍高 100 倍。但常規(guī)的銀染方法由固定、氧化、染色、顯影、終止等步驟組成,操作十分繁瑣,尤其不適用于大批量實驗。為解決此問題,本公司推出本產(chǎn)品,其特點如下:
1. 超快,整個過程只需要不到 60 分鐘。
2. 操作簡單,只有固定(30 分鐘)、染色(10 分鐘)和顯影(10 分鐘)三步。
3. 靈敏度比考馬斯亮藍染色高 100 倍,能檢測到 10ng 的蛋白質(zhì)條帶。
4. 三個成分中的兩個都是現(xiàn)用現(xiàn)配,可重復(fù)性好。
5. 本規(guī)格可配制 1000mL 蛋白銀染溶液 A(染色液),實際使用次數(shù)根據(jù) PAGE膠大小不同而不同。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝
蛋白銀染溶液 A 組分一(干粉) LM100810a1 2 g
蛋白銀染溶液 A 組分二,10× LM100810a2 100 mL
蛋白銀染溶液 A 組分三,10× LM100810a3 100 mL
蛋白銀染溶液 B 組分一,10× LM100810b1 100 mL
蛋白銀染溶液 B 組分二 LM100810b2 5 mL
使用手冊 100810sc 1 份
運輸及保存 常溫運輸及保存,有效期一年。
自備試劑 去離子水,乙醇和乙酸。
使用方法
一:配制銀染固定液 100 mL (對 mini PAGE 膠)
1. 將自備的40mL 無水乙醇、10mL 乙酸和50 mL去離子水充分混合即可使用。本試劑盒不含這些成分。
二:配制溶液 A
2. 需要配制的蛋白銀染溶液 A(染色液)的體積完全跟 PAGE 膠的大小相關(guān),一般的 mini-PAGE 膠需要 20-30mL。下面的用量是針對配制 100mL 蛋白銀染溶液 A。如果配制的蛋白銀染溶液 A 的體積不是 100mL,則需按比例改變各成分用量。在一干凈燒杯中加入下列成分攪拌混勻即可。蛋白銀染溶液 A 需要
新鮮配制。
成分 用量
自備的去離子水 80 mL
蛋白銀染溶液 A 成分一 0.2 g
蛋白銀染溶液 A 成分二 10 mL
蛋白銀染溶液 A 組分三 10 mL
三:配制蛋白銀染溶液 B
3. 需要配制的蛋白銀染溶液 B(顯色液)的體積完全跟 PAGE 膠的大小相關(guān),一般的 mini-PAGE 膠需要 20-30mL。下面的用量是針對配制 100mL 蛋白銀染溶液 B。如果配制的蛋白銀染溶液 B 的體積不是 100mL,則需按比例改變各成分用量。在一干凈燒杯中加入下列成分攪拌混勻即可。蛋白銀染溶液 B 需要
新鮮配制。
成分 用量
自備的去離子水 89.5 mL
蛋白銀染溶液 B 成分一 10 mL
蛋白銀染溶液 B 組分二 0.5 mL
四:銀染
4. PAGE 電泳或 SDS-PAGE 電泳結(jié)束后,將膠轉(zhuǎn)移到裝有 100 mL 銀染固定液的瓷盤中,搖晃 30 分鐘以去除干擾銀染的成分(如甘氨酸、SDS、DTT、甘油等)。注:此步很重要,否則銀染背景很高。
5. 用 100 mL 自備的去離子水漂洗 2 次,每次 2 分鐘。
6. 將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移到適當體積的蛋白銀染溶液 A 中,使蛋白銀染溶液 A 在輕柔搖晃過程中能夠淹沒 PAGE 膠。室溫搖晃處理 10 分鐘。
7. 倒掉蛋白銀染溶液 A,用 100 mL 自備的去離子水快速漂洗 2 次,每次半分鐘。
8. 將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移到適當體積的蛋白銀染溶液 B 中,使蛋白銀染溶液 B 在輕柔搖晃過程中能夠淹沒 PAGE 膠。室溫搖晃直到蛋白電泳條帶顯現(xiàn)(一般需要
10 分鐘左右)。
9. 迅速將 PAGE 膠置于適當背景下照相留存。膠的顏色肯能會逐漸加深,如果有必要保存膠,可以用自備的 5%的乙酸終止顯色。
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