一站式 Tricine-SDS-PAGE 電泳套裝

產(chǎn)品及特點(diǎn)Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前電泳法 變性分離多肽的主要方法，但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣，為此基因開 發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):

1. 一站式，提供除水和樣品以外的所有成分。

2. 即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。

3. 安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。

4. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝
丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺
干粉(19:1) 81205a
60 g/3g
(250mL 棕色瓶)
Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3× 81225 250 mL
50%甘油 82105b 25 mL
TEMED 100880 1.5 mL(棕色管)
過(guò)硫酸銨 100879 1 g
Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液，2× 81213 1 mL×5
Tricine-SDS-PAGE 陽(yáng)極
電泳液（干粉） 81214
10 L
（250mL 瓶）
Tricine-SDS-PAGE 陰極
電泳液（干粉） 81226
10 L
（塑料+熱封袋）
使用手冊(cè) 81205sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存（上樣液需要-20℃保存），保存期為一年。

自備試劑 Milli-Q 純水或同等級(jí)別的去離子水、水飽和的異丁醇 

使用方法

本公司強(qiáng)烈推薦在分離多肽時(shí)使用由 4%濃縮膠、10%隔離膠和 16%分離 膠從上到下組成的三層 Tricine-SDS-PAGE 膠，下面為配制該膠的流程。如 果用戶不需要隔離膠或需要調(diào)整各種膠的濃度，請(qǐng)按比例修改。

1. 配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（19：1）(丙烯酰胺-甲叉雙丙 烯酰胺溶液簡(jiǎn)稱 AB 溶液，下同): 直接在裝有 60 克丙烯酰胺和 3 克甲叉 雙丙烯酰胺的瓶中加入 140 mL 自備的去離子水，擰緊瓶蓋后 37℃水浴， 其間顛倒搖晃多次，直到干粉全部溶解，得到 30% AB 溶液（19：1）， 該溶液 4℃避光保存，在一個(gè)月內(nèi)用完。AB 溶液具有神經(jīng)毒性，一 定要戴手套操作。 

2. 配制 10%的 APS（過(guò)硫酸銨）：按每 0.1 克過(guò)硫酸銨干粉加 1 mL 去離子 水的比例將去離子水加到裝有硫酸銨干粉的 1.5 mL EP 管中，搖晃到粉 末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可在 4℃存放一周。過(guò)硫酸銨極 其容易吸潮，沒用完的過(guò)硫酸銨一定要擰緊蓋子。如果吸潮，可用自備的 分析純過(guò)硫酸銨替代。

3. 配制 30 mL 16%分離膠和 9 mL 10%隔離膠（足夠灌兩塊 0.75 mm× 14 cm×14 cm 膠）。

A) 標(biāo)記 2 個(gè) 50 mL 的三角瓶，按下表的用量加入各成分： 成份 分離膠瓶 隔離膠瓶 30% AB 溶液（19：1） 16.0 mL 3.0 mL Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3× 10.0 mL 3.0 mL 50%甘油 3.2 mL 無(wú) 去離子水 0.8 mL 3.0 mL 總體積 30 mL 9 mL

B) 混勻后真空脫氣 10-15 分鐘。

C) 灌分離膠：在分離膠瓶中加入 150 uL 10%的 APS 溶液和 30 uL

TEMED 溶液，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將分離膠溶液沿著一個(gè)隔條的

邊緣加到玻璃板夾層中，直到溶液的高度距離玻璃上沿還有 5 cm。

由于分離膠比重比隔離膠大，故可在其凝固前直接灌隔離膠。

D) 灌隔離膠：在隔離膠瓶中加入 75 uL 10%的 APS 溶液和 15 uL

TEMED 溶液，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側(cè)

隔條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到溶液離玻璃板頂部約 3 cm 高

為止。

E) 蓋 1cm 高的自備水飽和的異丁醇使膠面跟氧氣隔絕（氧氣會(huì)抑制膠

的凝固；此處水飽和的異丁醇可用水代替，但效果會(huì)差一些）。讓分

離膠和隔離膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

4. 配制 9 mL 4%濃縮膠（足夠灌兩塊 0.75 mm×14 cm×14 cm 膠）。

A) 在一個(gè) 50 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：

成份 用量

30%AB 溶液（19：1） 1.2 mL

Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3× 3.0 mL

補(bǔ)去離子水到 9 mL 需加 4. 8 mL

B) 混勻后真空脫氣 10-15 min。

C) 將 75 uL 新鮮配制的 10%的過(guò)硫酸銨溶液和 15 uL TEMED 溶液加

入到溶液中，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側(cè)隔

條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到夾層中的溶液離玻璃板頂部約 1

cm 高為止。

D) 插入 0.75 mm 厚的塑料梳子，再補(bǔ)加濃縮膠溶液填滿梳子間的空隙。

注意避免產(chǎn)生氣泡。讓濃縮膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

5. 小心拔出塑料梳子，在上層緩沖槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液(下稱陰極電泳液)，并用 1×陰極電泳液沖洗加樣孔。注：本產(chǎn)品提供 10 升的陰極電泳液干粉，將所有干粉溶解在 600-800 mL 去離子水中，最后定容到 1000 mL 即得 10×陰極電泳液，可以室溫放置，不需要滅菌，用時(shí)再用去離子水稀釋 10 倍成 1×陰極電泳液。

6. 在電泳裝置的下層緩沖液槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 陽(yáng)極電泳液(下稱陽(yáng)極電泳液)。注：本產(chǎn)品提供 10 升的陽(yáng)極電泳液干粉，將所有干粉溶解在600-800 mL去離子水中，用自備的濃鹽酸調(diào)pH 到8.9（25℃）后定容到 1000 mL 即得 10×陽(yáng)極電泳液，滅菌后可以 4℃長(zhǎng)期放置。用時(shí)再用去離子水稀釋 10 倍成 1×陽(yáng)極電泳液。

7. 在密封的螺蓋微量離心管中，用2×Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液按1：1 的比例稀釋蛋白樣品，于 100℃煮沸 3-5 分鐘。注意：如果樣品是蛋白沉淀物，則加入 50-100 uL 新配的 1×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液溶解；如果樣品是蛋白稀溶液，可先濃縮蛋白質(zhì)。與Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液混合后的樣品如未經(jīng) 100℃加熱滅活蛋白酶，切勿放于室溫。

8. 上樣。如果用考馬斯亮藍(lán)染色，對(duì)于成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品，上樣量為 20 uL（含 25-50 ug 總蛋白質(zhì)）；對(duì)于只有一種或幾種蛋白質(zhì)的樣品，上樣量為 1-10 uL。如果用銀染，上樣量可減少 10-100 倍。

9. 電泳。先 30 V 恒壓電泳 1 h（對(duì) 0.75mm×14cm×14cm 的膠而言），然后 150 V 恒壓電泳 4-5 h。注：本產(chǎn)品的 Tricine-SDS-PAGE 上樣液使用了考馬斯亮藍(lán) G-250 作為指示劑，其泳動(dòng)速度比最小的肽還快。

10. 終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)處理（用銀染染色，節(jié)約樣品）。

注意：考染或銀染時(shí)，基本步驟同蛋白 PAGE 膠染色，只是任何一步（尤其是固定步驟）的處理時(shí)間都不要超過(guò) 20 分鐘，否則多肽非常容易擴(kuò)散出 PAGE 膠而降低檢測(cè)的靈敏度。