Bradford法蛋白定量試劑盒

產品及特點Bradford 法測定蛋白質濃度是最為常用的蛋白檢測方法之一，在酸性條件下， 考馬斯亮藍（Coomassie G-250）染料能與蛋白質結合形成復合物，其大吸光 值也由 465 nm 轉移到 595 nm，通過顏色的強弱即可測定蛋白質濃度的高低。

本 產品是基于 Bradford 法蛋白檢測原理開發(fā)的產品，具備下述特點：

1. 快速，10-20 個樣品只需要 10 分鐘即可完成測定。

2. 穩(wěn)定，加樣混勻后 2 分鐘既可測定，1 小時內吸光度變化不超過 10%。

3. 線性范圍在 50～1000 μg/mL。

4. 最小測量體積為 1-20 uL，低測量蛋白量為 0.5 ug。

5. 即開即用，不需要單獨購買每個成分再配制。

6. 有常規(guī)和微量兩種檢測模式。
規(guī)格及成分 成 分 編 號 小紙盒包裝
溶液 A LM80814a 250 mL（棕色瓶）
BSA 標準（2 mg/mL） LM131070 1 mL
定性濾紙（直徑 12.5cm） LM80814b 50 張
使用手冊 LM80814sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸和保存，BSA 標準需低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

自備儀器試劑 超純水、分光光度計

使用方法

一、制備溶液 A 工作液

1. 將試劑盒提供的溶液 A 與自備的超純水按 1：4 比例充分混合即為溶液 A 工作 液 (例：4 mL 溶液 A + 16 mL 超純水= 20 mL 溶液 A 工作液)。每次配制多 少取決于檢測方法和測試體積，需要預先按下面的手冊計算。

2. 用本試劑盒提供的濾紙過濾溶液 A 工作液。過濾后的工作液室溫條件下可穩(wěn)定 使用 1-2 星期。注意：不同型號、規(guī)格的濾紙，具有不同的孔徑，導致可通過 的分子各不相同。請使用本公司指定提供的濾紙，否則會導致不同的測定結果。

二、制備 BSA 標準品梯度稀釋液

3. 測試開始之前，應首先制備 BSA 標準品梯度稀釋液。本試劑盒使用 BSA 作為 標準品。用戶也可以使用自備的其他蛋白質濃度測定用標準品。每個濃度具體 需要多少體積取決于檢測方法和測試體積，需要預先按下面的手冊計算。沒有 用完的 BSA 標準品梯度稀釋液可以放-20℃待下次使用。

a) 如果進行常規(guī)檢測，建議用溶解待測樣品的緩沖液將 BSA（2 mg/mL） 稀釋成下面的 8 個濃度： 0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、 500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL

b) 如果進行微量檢測，建議用溶解待測樣品的緩沖液將 BSA（2 mg/mL） 稀釋成下面的 6 個濃度： 0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL

三、常規(guī)檢測流程

常規(guī)檢測法在蛋白濃度 30 - 1000 μg/mL 范圍內呈現 R 2 = 0.996 的直線線 性回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內的蛋白樣品。

4. 在標記的離心管中分別加入 N 個待測蛋白樣品和 8 個個 BSA 梯度稀釋液，然后 再在每個離心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色 杯的體積。 如果用 3 mL 比色杯檢測，則取 100 μL 樣品+5 mL 溶液 A 工作液； 如果用 1 mL 比色杯檢測，則取 40 μL 樣品+2mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，則取 20 μL 樣品+1 mL 溶液 A 工作液。

5. 樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

6. 室溫放置 5 分鐘。

7. 分光光度計檢測吸光度。波長設定= 595nm。用 96 孔板測定時，應確保沒有 氣泡，否則氣泡會對增加吸光度的讀數。

8. 將待測樣品的測定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測定值繪制的標準曲線比較得 到待測樣品的蛋白質濃度。

四、微量檢測流程

此方法在蛋白濃度 1～20 μg/mL 范圍內呈現 R 2 = 0.992 的直線線性回歸， 可精確定量蛋白濃度在此范圍內的蛋白樣品。再在每個離心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。終 體積多少取決于比色杯的體積。 如果用 3 mL 比色杯檢測，則取 4 mL 樣品+1 mL 溶液 A 工作液； 如果用 1 mL 比色杯檢測，則取 2 mL 樣品+0.5 mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，則取 400 μL 樣品+100 μL 溶液 A 工作液。

10. 樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

11. 室溫放置 5 分鐘。

12. 分光光度計檢測吸光度。波長設定= 595nm。用 96 孔板測定時，應確保沒有 氣泡，否則氣泡會對增加吸光度的讀數。

13. 將待測樣品的測定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測定值繪制的標準曲線比較得 到待測樣品的蛋白質濃度。