大腸桿菌TB1感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本感受態(tài)細(xì)胞來源于 JM 83，是 JM 83 hsdR 型，只含有大腸桿菌 RNA polymerase， 缺少 BL21 (DE3)菌株的 T7 RNA polymerase，適合 NEB 公司的 pMAL 系列質(zhì)粒原核 蛋白表達(dá)(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于 pET 系列質(zhì) 粒的表達(dá)，具有鏈霉素抗性。TB1 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng) pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化 效率高達(dá) 108cfu/μg。

菌株基因型為：F– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Strr )[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR
規(guī)格及成分 成分 編號 包裝
本產(chǎn)品 140645 0.1 mL×10
使用手冊 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 25 分鐘。

3. 42℃熱擊 45 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中并靜置 2-3 分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

4. 每個離心管中加入 700 μL 無菌的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃搖床，200 rpm 振蕩培養(yǎng) 60 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μL 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。

6. 將平板倒置于 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 12-16 小時。

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。

2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3. 誘導(dǎo)時，IPTG 濃度可選（0.1-2mM 均可）。

4. 為獲得需要量的蛋白，佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG 濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。