大腸桿菌Stbl3化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品是衍生自大腸桿菌 HB101 菌株，經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞。特別適 用于克隆不穩(wěn)定載體片段，如含有同向重復序列的慢病毒 DNA 和其他反轉錄病毒載體。使 用 pUC19 質粒檢測，本產(chǎn)品轉化效率可達 108。本產(chǎn)品具有下列特點：

1. 此菌株具有鏈霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。

2. 本產(chǎn)品是復制慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株，對慢病毒載體等較大的質粒轉化的效 果好，能夠有效抑制長片段末端重復區(qū)的重組，減低錯誤重組的可能性。

3. 非常穩(wěn)定，能提高慢病毒載體或其他不穩(wěn)定載體的克隆效率。

4. 菌株基因型為：F – mcrB mrr hsdS20(rB –, mB –) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR ) xyl-5 λ – leu mtl-1 endA1+
規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝
大腸桿菌 Stbl3 化學感受態(tài)細胞 121112 0.1 mL×10
使用手冊 121112sc 1 份

運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插 入冰中）。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據(jù)實際情況分裝 使用。 以下實驗以 50 μL 感受態(tài)細胞為例。

2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實際情況加入適量 的 DNA，質粒或連接產(chǎn)物），用手撥打 EP 管底或用移液器輕輕吹打混勻，冰上靜置 25 分鐘。

3. 42℃水浴熱擊 45 秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘，晃動會降低 轉化效率

。 4. 每個離心管中加入 450 μL 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）。

5. 30℃，225 rpm 復蘇 90 分鐘。（當質粒中含有不穩(wěn)定片段時， 30℃培養(yǎng)可降低錯誤 重組的概率，若轉化 control PUC19 計算轉化效率，則需 37℃，225 rpm 復蘇 60 分鐘。）

6. 5000 rpm 離心 1 分鐘收菌，留取 100 μL 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相 應抗生素的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基上。

7. 平板倒置放于 30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。（若轉化 control PUC19 計算轉化效率，則需 37℃培養(yǎng)過夜）

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的 DNA 總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板； 若轉化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數(shù)較 少，可通過離心（5,000 rpm，1 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于 平板中。

2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 30℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再 涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。