動物細胞核制備試劑盒（密度梯度法）
原理及特點 用高密度介質(zhì)來分離動物軟體組織（如肝臟、脾臟等）細胞核是目前主流的方法，它是由 Chauveau 于 1956 年發(fā)明，其原理是細胞核的密度較大，在高速離心條件下（40 000g 1 小時）可在高密度介質(zhì)（2.2mol/l 蔗糖溶液）中沉降下來，從而達到與細胞質(zhì)其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細胞核，得到廣泛應用。本產(chǎn)品就是在 Chauveau 方法的基礎(chǔ)上優(yōu)化改進而來，它具有下列特點：
1. 基于密度梯度分離，可有效去除細胞質(zhì)及其他細胞器，得到的細胞核純凈，
2. 加進氯化鈣、氯化鎂、氯化鉀等改變分離介質(zhì)滲透壓的物質(zhì)，減少了細胞核的脆性，增加了細胞核的完整性。
3. 精心調(diào)節(jié)了介質(zhì)的 pH，防止細胞核在分離過程中的聚集，還能保持細胞核的精細結(jié)構(gòu)
4. 快速，整個操作過程僅需 1 小時即可完成（對一個樣品而言）。
5. 提供染色試劑，可以在普通光學顯微鏡下檢測純化的細胞核的純度。
6. 處理溫和，得到的細胞核中的大部分蛋白質(zhì)都具有活性，可以用于膠遲阻實驗、酶活性分析細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究；也可用于超大片段 DNA 的純化。
7. 不但適用于動物和植物培養(yǎng)細胞，還能用于實體組織（能用 Dounce 或Potter 勻漿器勻漿的組織均可）。
8. 一次微量提取足夠處理 0.1 克組織或 10E7 個培養(yǎng)細胞，本產(chǎn)品足夠 50次微量提取。
動物細胞核制備試劑盒（密度梯度法）運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年
自備試劑 手動或電動 Dounce 或 Potter 組織勻漿器（研磨杵和套管的空隙為 0.1mm，如果小于細胞核的直徑，則會使細胞核破裂）、水平式低溫高速離心機、光學顯微鏡。
使用方法 一、準備工作：先將溶液 A 的成分二（干粉）全部加入到溶液 A 成分一（溶液）中，搖晃溶解后得到 100mL 溶液 A。將溶液 B 的成分二（干粉）全部加入到溶液 B 成分一（溶液）中，搖晃溶解后得到 50mL 溶液 B。4℃放置不能超過 2 天，長期放置需要放-20℃。
二、微量細胞核分離（放量提取各試劑的用量可以按比例放大）：
1. 對組織細胞：稱取 100~200 mg 新鮮組織（如動物肝臟、腦、心肌和植物葉片等），用自備的 PBS 或生理鹽水洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀或刀片將其剪為碎塊（大小為 1cm3，過小反而不利于勻漿）放入小容量Dounce 或 Potter 玻璃勻漿器內(nèi)。
2. 對培養(yǎng)細胞：用自備胰酶按標準方法消化培養(yǎng)細胞，PBS 洗滌，800×g5~10 分鐘離心收集細胞，計數(shù)。每次微量提取需要 5 × 10E7 個細胞，加入 1.0 mL 預冷的溶液 A 重懸細胞，然后轉(zhuǎn)移到小容量 Dounce 或Potter 玻璃勻漿器內(nèi)，
3. 用 Dounce 或 Potter 組織勻漿器在冰上破碎組織或細胞。如果用手動勻漿器，一般需要 20~30 次。如果用電動勻漿器，一般需要處理 3-5 次，每次 5～10 秒鐘（轉(zhuǎn)速為 500r/min）。推薦使用的兩種勻漿器，空隙為 0.1 mm
4. 將勻漿液轉(zhuǎn)移到離心管中。如果勻漿液有可見的結(jié)締組織和未破碎的組織塊，可以用三層自備的紗布放在 1.5 mL 離心管管口，將勻漿液過濾進入離心管?？扇∩倭繛V液涂在載玻片上制得涂片 A，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
5. 4℃，700-800×g 水平離心 5-10 分鐘。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。可取少量上清液涂在載玻片上制得涂片 B，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
6. 加入 0.5 mL 預冷溶液 A 重懸沉淀。用預冷的勻漿器（用前需要將表面的組織洗去）重懸沉淀。可取少量上清液涂在載玻片上制得涂片 C，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
7. 在水平型離心管中加入 0.5mL 預冷的溶液 B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重懸液。
8. 在 4℃ 23000g 離心 30 分鐘，管底的沉淀即為細胞核。
9. 小心吸棄上清液。注意：上清一般比較粘稠，倒立一段時間。
10.用 0.5 mL 溶液 A 重懸沉淀。
11.在 4℃ 1500g 離心 5 分鐘，吸棄上清，沉淀即為純凈的細胞核?？梢灾苯邮褂茫部梢约拥润w積的自備甘油，混勻后放液氮或-70℃保存?？扇∩倭可蠎腋∫和吭谳d玻片上制得涂片 D，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
12.用本方法一般可以從 0.1g 肝臟組織中純化到 1-2×107 個細胞核。如果后續(xù)試驗是 Western Blot 和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核后上樣。
三、顯微鏡檢測涂片，計算效率
1. 將干燥后的 A-D 四張涂片加入固定液固定 15 分鐘，晾干。
2. Giemsa 染液染 10 分鐘。
3. 自備蒸餾水漂洗數(shù)秒，用濾紙吸干水。
4. 用顯微鏡（40×）檢查涂片，細胞核將呈紫紅色，混雜的細胞質(zhì)為淺藍色碎片。根據(jù)每步細胞核的數(shù)量可以粗略估計回收效率。