大腸桿菌BL21(DE3)化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品及特點BL21 Star(DE3)感受態(tài)細胞來源于 BL21(DE3)菌株，由特殊工藝制作，使用 pUC19質粒檢測本產(chǎn)品，轉化效率可達 107cfu/μg。BL21 Star(DE3)菌株的特點是含有 rne131 基因突變體。rne131 突變基因能夠增強菌株細胞內 mRNA 的穩(wěn)定性，從而有效提高蛋白表達能力。本產(chǎn)品主要適用于 T7 啟動子表達載體(如 pET 系列)的高水平蛋白表達。菌株基因型為：F- ompT hsdSB(rB-mB) gal dcm rne131(DE3)
規(guī)格及成分 成分 編號 包裝
本產(chǎn)品 LM90505 0.1 mL×10
使用手冊 1 份

運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μL，可以根據(jù) 實際情況分裝使用。 以下實驗以 50 μL 感受態(tài)細胞為例。

2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實際情況加入適量 的 DNA，通常 100 μL 感受態(tài)細胞能夠被 1 ng 超螺旋質粒 DNA 所飽和），用移液器 輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。

3. 42℃熱擊 45 秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。

4. 每個離心管中加入 450 μL 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復蘇。

5. 根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的 SOC 或 LB 固體 瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體被吸收， 倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的 DNA 總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板； 若轉化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數(shù)較 少，可通過離心（4,000 rpm，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于 平板中。

2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再 涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。