加A試劑盒

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品利用 Taq DNA polymerase 的不依賴于模板的末端轉(zhuǎn)移酶活性，在只有 dATP 存在的情況下，在平末端的 DNA 片段加上一個 dA 尾巴，使平末端片段也能被 T 載體克隆。

1. 簡單，2 X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要單獨準備。

2. 適用于任何平末端的 DNA 片段，包括 Pfu DNA polymerase 等酶合成的 DNA 片段。

3. 產(chǎn)物可以直接用于與 T 載體的連接。
規(guī)格及成分 成份 編號 塑料袋包裝
2 X Tailing Buffer LM60105A 1 mL
Taq DNA polymerase (5U/uL) LM51206 50 μL
使用手冊 60105sc 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 PCR 片段、超純水

使用方法 一：反應前純化處理：

用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶擴增得到的 DNA 片段，必須經(jīng)過徹底的去除殘留的酶的處理過程（如酚/氯仿抽提或 Proteinase K 處理），否則它們將在加 A 反應時，切除掉加上的 尾巴，干擾反應?？梢圆扇∧z回收和酚/氯仿抽提法等常規(guī)方法純化，后溶解在水或 TE 中，終濃度以 0.1 ug/uL 為宜。

二：加 A 反應

在干凈的 0.5 mL 或 1.5 mL 離心管中，分別加入下列成分：

回收的 DNA 片段(0.2-2 ug)

25 uL 2 X dA Tailing Buffer

1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL）

補水到 50 uL 后 72℃保溫 2 小時

三：反應后處理

加 A 反應后，Taq DNA polymerase 將與 DNA 末端緊密結(jié)合，所以必須酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 處理后再用酚/氯仿抽提效果會更好。得到的 DNA 溶于適量水和 TE 中后即可用于 T 載體的連接反應。