2XLAMP MagicMix(無色）

產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是 2×LAMP MagicMix（無色），可以用于 LAMP 等溫?cái)U(kuò)增，LAMP 即Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增），是 2000 年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴(kuò)增方法。它利用 4 條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的 DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60 分鐘完成擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于 PCR 技術(shù)，同時(shí)還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、等過程。目前已成功應(yīng)用于人類及動(dòng)植物、細(xì)菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用的 2×LAMP MagicMix，無色。

2. 高特異性，由于同時(shí)使用 4-6 條特異引物，所以特異性比 PCR 更高。

3. 高擴(kuò)增效率，擴(kuò)增效率可達(dá)到 10E9-10E10，比PCR 靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)，可檢測到單拷貝的 DNA 分子

4. 65℃左右等溫?cái)U(kuò)增，可以不需要貴重的熱循環(huán)儀。

5. 即開即用，包含了除引物和模板 DNA 外的所有成份，十分方便。

6. 本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。

7. 提供擴(kuò)增對(duì)照，便于在遇到困難時(shí)分析原因。

8. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 熱封袋包裝
2×LAMP MagicMix（無色） 190601a 500 uL（綠色蓋）
LAMP 陽性對(duì)照模板-引物混合物 130923a 45 uL（黃色蓋）
使用手冊 190601sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 LAMP 模板、LAMP 引物、自備可見光染料

使用方法 1. 制備模板DNA：選用合適的方法制備模板DNA。

2. 配制自備的5×LAMP引物混合液。先加超純水或自備TE緩沖液將自備的下列6種（或4種）引物干粉稀釋到母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足夠250次20uL體系的LAMP擴(kuò)增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液體積異于1mL，則各成分的用量請(qǐng)按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2年。引物名稱 母液濃度 加母液量

在 5×LAMP 引物

混合液中的濃度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超純水 780 uL

如果沒有 Loop 引

物，則用水替代

終體積 1 mL

3. 在冰上融化2×LAMP MagicMix，混勻，稍離心。如果有N個(gè)樣品，則在

N+2個(gè)反應(yīng)管中加入以下組份：

成份 樣品管 LAMP

陽性對(duì)照

LAMP

陰性對(duì)照

2×LAMP MagicMix（無色） 10 uL 10 uL 10 uL

自備 5×LAMP 引物混合液 4 uL 不加 4 uL

自備模板 DNA 1-100ng 不加 不加

LAMP 陽性對(duì)照模板-引物混合物 不加 4 uL 不加

補(bǔ)自備超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

注意：此步可加入自備的各種LAMP可視化染料，這樣反應(yīng)結(jié)束后可以根據(jù)反應(yīng)液的顏色變化或?qū)崟r(shí)熒光強(qiáng)度變化來判斷是否有擴(kuò)增，不需要開蓋，避免污染。如果加入了熒光染料，則需要在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)和實(shí)時(shí)檢測。

4. 混勻，置于63℃保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴或水浴保溫，沒有熱蓋，必須覆蓋50uL的石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，影響反應(yīng)效率。

5. 產(chǎn)物取擴(kuò)增產(chǎn)物5 uL上樣，進(jìn)行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，可見LAMP特征性電泳圖譜。

6. 結(jié)果分析：如果本試劑盒提供的陽性對(duì)照-引物混合物能夠擴(kuò)增而陰性對(duì)照不能擴(kuò)出，則實(shí)驗(yàn)有效。如果陽性對(duì)照-引物混合物沒有擴(kuò)增出條帶，則試
劑盒的問題，請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。如果陰性對(duì)照（水作為模板）有擴(kuò)增出條帶，則說明LAMP樣品或試劑有過去的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，需要注意操作的規(guī)范性，如果不能解決，可以重新設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增新的靶片段。也可以使用不需要開蓋的2×可視化LAMP MagicMix。