糖蛋白染色試劑盒(PAGE膠專用）
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品為在 PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上檢測糖蛋白的試 劑盒。該方法使用三種試劑，所需時間僅需不到兩小時，而其他的染色方法需 要四到五小時。染色后的糖蛋白為品紅色條帶，背景為淺粉色或者無色。它有 如下特點(diǎn)：
1. 一站式，包括一種陽性對照蛋白及一種陰性對照蛋白，用戶不要單獨(dú)配制 所需成分，簡單快捷。
2. 通過共價修飾方式檢測糖基，不檢測蛋白部分。
3. 靈敏度一般可以達(dá)到微克級別，但實(shí)際靈敏度跟靶蛋白糖基化程度相關(guān)。
4. 可以用于 SDS-PAGE 和 2D 電泳的凝膠檢測，也可以用于瓊脂糖凝膠電 泳的檢測（但背景較高），還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測。
5. 本產(chǎn)品足夠染色 10 張 mini-PAGE 膠或 20 張 8×8cm 的蛋白印跡纖維 素膜。
糖蛋白染色試劑盒(PAGE膠專用）
規(guī)格及成分 成份 編號 大紙盒包裝
氧化試劑 131075a 2.5 g（棕色管）
糖蛋白染色試劑 131075b 250 mL（棕色瓶）
還原試劑 131075c 1.25 g
陽性對照（辣根過氧化物酶） 131075d 1 mg（棕色管）
陰性對照（大豆胰蛋白酶抑制劑） 131075e 1 mg（棕色管）
250mL 塑料瓶（空） - 2 個
使用手冊 131075sc 1 份
糖蛋白染色試劑盒(PAGE膠專用）運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，但陽性對照和陰性對照干粉需要 4℃或更低溫度長期保存， 有效期一年，但糖蛋白染色試劑的有效期只有半年（從出廠時間開始計(jì)算）。
自備試劑 甲醇、冰醋酸、超純水、1×SDS-PAGE 上樣緩沖液等
使用方法 實(shí)驗(yàn)前
使用方法 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1. 配制 3%醋酸溶液：將 30 mL 自備的冰醋酸與 970 mL 超純水混勻，室 溫保存?zhèn)溆谩?/p>
2. 配制 50%甲醇溶液：將 250 mL 甲醇與 250 mL 超純水混勻，室溫保存 備用。
3. 配制氧化試劑溶液：將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的 3%醋酸溶液（第 1 步配制）， 充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>
4. 配制還原試劑溶液：將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的超純水，充分混勻溶解后得 到還原試劑溶液，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>
5. 配制陽性對照（辣根過氧化物酶）溶液：向裝有 1 mg 辣根過氧化物酶固 體的棕色管中加入 1 mL 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得辣 根過氧化物酶溶液的濃度即為 1mg/mL，然后分裝成 100uL/管共 10 管，留下一管當(dāng)天使用，其余的放-20℃長期保存。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來說，每條泳道加 10 μL 的陽性對照溶液即可。
6. 配制陰性對照（大豆胰蛋白酶抑制劑）溶液：向裝有 1 mg 大豆胰蛋白酶 抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得大豆 胰蛋白酶抑制劑溶液的濃度即為 1 mg/mL，然后分裝成 100uL/管共 10 管，留下一管當(dāng)天使用，其余的放-20℃長期保存。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來說，每個泳道加 10 μL 的陰性對照溶液即可。
7. 樣品稀釋：用 SDS-PAGE 上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為 1mg/mL， SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為 1×。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來 說，每個泳道加 10μL 的樣品。 凝膠染色的操作步驟（注意:請?jiān)谕L(fēng)櫥中進(jìn)行以下操作）
8. 取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠，加入到裝有 100mL 50%甲醇溶液的器 皿中，完全浸泡 30 分鐘后，倒出甲醇溶液。
9. 用 100mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。
10. 將膠塊轉(zhuǎn)移到裝有 25mL 氧化試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。
11. 用 100mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。
12. 將膠塊轉(zhuǎn)移到裝有 25mL 糖蛋白染色試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。 （注：若染色試劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不要加熱溶解晶體。）
13. 將膠塊轉(zhuǎn)移到裝有 25mL 還原試劑的器皿中，輕輕振蕩 5 分鐘。
14. 用 3%醋酸溶液洗滌膠塊，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現(xiàn)為品 紅條帶。膠塊保存在 3%醋酸溶液中。
硝化纖維素膜染色的操作步驟（注意:請?jiān)谕L(fēng)櫥中進(jìn)行以下操作）
1. 用 20mL 3%醋酸溶液洗滌膜兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。
2. 將膜轉(zhuǎn)移到 10mL 的氧化試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。
3. 用 10mL 3%醋酸溶液洗滌膜 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。
4. 將膜轉(zhuǎn)移到 10mL 的糖蛋白染色試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。（注：若染 色試劑中有晶體析出，只需離心取上清液去除晶體即可，不要加熱來溶解 晶體。）
5. 將膜轉(zhuǎn)移到 10 mL 還原試劑中，輕輕振蕩 5 分鐘。
6. 用 3%醋酸溶液洗滌膜，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現(xiàn)為品紅 條帶。膜可保存在 3%醋酸溶液中。
7. 檢測后如果沒有條帶，可以用轉(zhuǎn)膜后的 PAGE 膠進(jìn)行檢測，因?yàn)樘堑鞍?（尤其是高度糖基化的蛋白）轉(zhuǎn)膜效果比較差。
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