填入法DNA探針末端標(biāo)記試劑盒

原理及特點(diǎn)本產(chǎn)品是基于 DNA 聚合酶能夠在 DNA 粘性末端的 3’凹端摻入 dNTP的原理而設(shè)計(jì)，該反應(yīng)的示意圖如下：本產(chǎn)品是在上述原理的基礎(chǔ)上開發(fā)的，具有下列特點(diǎn)：

1. 快速，15 分鐘即可完成標(biāo)記反應(yīng)。

2. 可用于任何 3’凹端的 DNA 片段。

3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛標(biāo)記的核苷酸等）。

4. 提供不帶標(biāo)記核苷酸、帶生物素標(biāo)記核苷酸和帶地高辛標(biāo)記核苷酸三種選擇。

5. 同時提供非標(biāo)記的 dNTP，用戶可以根據(jù)粘性末端序列使用。

6. 標(biāo)記的探針可用于電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）、原位雜交（ISH）、NorthernBlot（不推薦用于低豐度 RNA 檢測）、小 RNA Northern、Southern Blot（不推薦用于單拷貝基因檢測）、菌落雜交、斑點(diǎn)印跡雜交分析等。

7. 本產(chǎn)品足夠 5 次 20uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)。

8. 本產(chǎn)品僅供科研使用。

規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝

Klenow DNA 聚合酶 131235a 10 uL（紅蓋）

10×Klenow DNA 聚合酶緩沖液 131235b 10 uL（白蓋）

dATP 溶液，2.5mM 130912 10 uL（黃蓋）

dTTP 溶液，2.5mM 130913 10 uL（綠蓋）

dGTP 溶液，2.5mM 130914 10 uL（藍(lán)蓋）

dCTP 溶液，2.5mM 130915 10 uL（紫蓋）

Biotin-11-dUTP 溶液 120653b 10uL（本色蓋僅 B 型）

DIG-11-dUTP 溶液 120653c 10uL（本色蓋僅 C 型）

超純水 100935 1 mL（藍(lán)蓋）

使用手冊 120653sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年

自備試劑 DNA 模板

使用方法 1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設(shè)置一個 20uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)（如果需

要標(biāo)記更多探針，請?jiān)黾訕?biāo)記體積而不要增加探針 DNA 的濃度）：

成份 用量

待標(biāo)記 DNA（3’凹陷） 100-200 pmol

Klenow DNA 聚合酶緩沖液，10× 2 uL

自備標(biāo)記核苷酸（A 型）

或

Biotin-11-dUTP 溶液（B 型）

或

DIG-11-dUTP 溶液（C 型）

1 uL

與標(biāo)記核苷酸不相同的三種非標(biāo)記

核苷酸，2.5mM(對 B 型和 C 型，標(biāo)

記的是 dUTP，相當(dāng)于 dTTP，因此

應(yīng)該加 dATP、dCTP 和 dGTP)

各 1uL，共 3uL

Klenow DNA 聚合酶 1 uL

超純水 補(bǔ)到 20 uL

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。

3. 70℃ 10 分鐘滅活 Klenow DNA 聚合酶。

4. 如果需要，可以用斑點(diǎn)雜交法檢測標(biāo)記效率（本產(chǎn)品不含相關(guān)試劑）。

5. 如果是非同位素標(biāo)記，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非

同位素標(biāo)記的探針，請不要酚/氯仿抽提，因?yàn)榉峭凰貥?biāo)記物一般會使

探針 DNA 進(jìn)入有機(jī)相而丟失。

6. 使用時需將探針以 1-8 ng/uL 的終濃度加入到雜交液中（如果探針是雙鏈 DNA，加入前還需熱變性）。如果不立即使用，非同位素標(biāo)記的探針DNA 可-20℃長期放置一年，同位素標(biāo)記的探針 DNA 不能放置。