TdT加尾法DNA探針地高辛標(biāo)記試劑盒

原理及特點(diǎn)本產(chǎn)品是基于 TdT 末端轉(zhuǎn)移酶能夠在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的 原理而設(shè)計(jì)，該反應(yīng)的示意圖如下： 本產(chǎn)品是在上述原理的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的，具有下列特點(diǎn)：

1. 快速，15 分鐘即可完成標(biāo)記反應(yīng)。

2. 不但可用于單鏈 DNA 和 DNA Oligo 標(biāo)記，還可用于 3’突出的雙鏈 DNA 標(biāo)記，但后者標(biāo)記效率稍低。

3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛標(biāo)記的核苷酸等）。

4. 提供不帶標(biāo)記核苷酸、帶生物素標(biāo)記核苷酸和帶地高辛標(biāo)記核苷酸三種 選擇。

5. 同時(shí)提供非標(biāo)記的 dATP，用戶可以用其調(diào)節(jié)加尾長(zhǎng)短和標(biāo)記核苷酸摻 入比例。 6. 標(biāo)記的探針可用于電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）、原位雜交（ISH）、Northern Blot（不推薦用于低豐度 RNA 檢測(cè)）、小 RNA Northern、Southern Blot （不推薦用于單拷貝基因檢測(cè)）、菌落雜交、斑點(diǎn)印跡雜交分析等。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 十孔盒包裝
TdT 緩沖液，5× 90605a 20 uL
TdT 末端轉(zhuǎn)移酶（10 U/uL） 90605b 10 uL
dATP，2 mM 90605c 5 uL
標(biāo)記核苷酸 見(jiàn)注 （A、B、C 不同，見(jiàn)注）
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè) 90605sc 1 份
注：A 型用于自選標(biāo)記，用戶需自備標(biāo)記核苷酸，本產(chǎn)品不提供標(biāo)記核苷
酸；B 型提供 5 uL Biotin-11-dUTP（CAT#：100920）；C 型提供含 5 
uL DIG-11-dUTP（CAT#：100921）。

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年

自備試劑 DNA 模板 

使用方法 1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設(shè)置一個(gè) 20 uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)（如果需要標(biāo)記更多探針，請(qǐng)?jiān)黾訕?biāo)記體積而不要增加探針 DNA 的濃度）：
成份 用量
探針 DNA 100-200 pmol
TdT Buffer，5× 4 uL
標(biāo)記核苷酸，1 mM
（A 型需自備標(biāo)記核苷酸） 1 uL
dATP，2 mM （見(jiàn)下注）
TdT 末端轉(zhuǎn)移酶（10 U/uL） 2 uL
超純水 補(bǔ)到 20 uL
注: dATP 可以不加，但這樣得到的加尾全部是標(biāo)記核苷酸，由于 DIG 或 biotin 的空間阻礙，這種探針的靈敏度不一定。如果不摻入 dATP 的探針雜交效果不好，在加尾反應(yīng)時(shí)摻入一定比例的 dATP 到標(biāo)記核苷酸中，以控制標(biāo)記核苷酸的密度不至于太
高，這樣可以提高比活。標(biāo)記核苷酸和非標(biāo)記的 dATP的具體比例為多少，可以自己優(yōu)化。
2. 37℃反應(yīng) 15 分鐘，延長(zhǎng)到 30 分鐘也可以。如果沒(méi)有非標(biāo)記核苷酸存在，一般可以加尾 3-5 個(gè) Biotin 或 DIG 標(biāo)記的核苷酸（標(biāo)記物空間阻礙抑制延長(zhǎng)）；如果有在加尾反應(yīng)中加入一定比例的非標(biāo)記核苷酸 dATP（其他dNTP 也可，只是本試劑盒只提供 dATP 而已），每條探針上可加上約 100個(gè)核苷酸，平均含 5 個(gè)標(biāo)記核苷酸
3. 70℃ 10 分鐘滅活 TdT 酶。
4. 如果需要，可以 PAGE 電泳+銀染（相關(guān)試劑需要另購(gòu)）檢測(cè)標(biāo)記效率，帶標(biāo)記的探針泳動(dòng)速度將低于沒(méi)標(biāo)記的探針。
5. 如果是非同位素標(biāo)記，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非同位素標(biāo)記的探針，請(qǐng)不要酚/氯仿抽提，因?yàn)榉峭凰貥?biāo)記物一般會(huì)使探針 DNA 進(jìn)入有機(jī)相而丟失。