RNA電泳液(又名MOPS電泳液),10×
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是預(yù)配的 10 X RNA 專用電泳液(即 10 X MOPS 電泳液),專門用于
RNA 電泳分析。
1. 即開即用,用戶不需要自己進行 RNase 滅活、高壓滅菌、pH 調(diào)節(jié)等操作。
2. 與 Northern 雜交等后續(xù)反應(yīng)兼容。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 100 mL 包裝 250 mL 包裝
RNARUN 3150 100 mL 250mL
使用手冊 3150sc 1 份 1 份
運輸及保存 常溫運輸及保存,有效期一年。
自備試劑 瓊脂糖、37%甲醛、EB (10 mg/mL)、去離子甲酰胺
使用方法 一、用本產(chǎn)品配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%, 100 mL)
1. 在三角瓶中加入下列成份:
瓊脂糖 1.2 g
DEPC 水 87 mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后,加入 10 mL 本產(chǎn)品。
3. 待膠冷卻至 60?C 左右,再加下列成份:
37%甲醛 3.0 mL
EB (10 mg/mL) 2-4 ?L
4. 混勻后倒膠, 凝固半小時后即可以使用瓊脂糖甲醛變性膠(需要量
RNA 變性上樣液和 RNA 電泳液)。
二、用本產(chǎn)品配制 RNA 變性上樣液(以一個 RNA 樣品為例)
本產(chǎn)品 2.0 ?L
37%甲醛 3.5 ?L
去離子甲酰胺10.0 ?L
RNA 樣品 4.5 ?l于 85?變性 10 min,冰浴冷卻 5 分鐘后加 RNA 變性上樣液后直接上樣。
三、用本產(chǎn)品配制 RNA 電泳液
將本產(chǎn)品用無RNase的水稀釋十倍后即可直接用于RNA的瓊脂糖甲醛變性膠使用。
四、電泳條件
電泳時,將凝膠預(yù)電泳 5 min(電壓為 5 V/cm)。隨后加樣品和分子量對照(如果有的話),以 3-4 V/cm 的電壓電泳,直至溴酚藍遷移至膠下游的 3/4 處。電泳結(jié)束后,在紫外燈下拍照。
【注意事項】
每一泳道至多可分析 30 ?g RNA,通常用 10-20 ?g 總 RNA 進行Northern雜交,可以檢測高豐度 mRNA(占mRNA總量的 0.1%以上);如待測 RNA 含量極微,每個泳道需加 0.5-3.0 ?g poly(A)+ RNA。溴酚藍泳動速度相當(dāng)于 300bp DNA,二甲苯青 FF 泳動速度相當(dāng)于 4Kp DNA。
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