液相內(nèi)毒素清除劑

產(chǎn)品及特點 

去除液體生物樣品（包括質粒 DNA 樣品）中污染的內(nèi)毒素(endotoxin)具有重要的臨床意義，因為內(nèi)毒素對原代細胞、傳代細胞和整體動物均具有顯著的毒性作用。由于內(nèi)毒素(化學本質為脂多糖，即 lipopolysaccharides)是包括 E.coli在內(nèi)的革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要組成成分，并且?guī)щ娦愿?DNA 類似，所以從 E.coli 細胞中提取的質粒 DNA 和重組蛋白質藥物中常常含有大量的內(nèi)毒素污染，并且很難用用常規(guī)方法（包括硅膠膜吸附，離子交換吸附、凝膠排阻過濾、氯化銫超速離心）去除。本產(chǎn)品就是專門用于高效去除生物樣品中的內(nèi)毒素污染。

1. 簡單快速，一次處理只需要 20 分鐘左右，不需要復雜儀器設備。

2. 高效，一次處理可以去除 90%以上的內(nèi)毒素，經(jīng)過三次重復抽提可將內(nèi)毒素的水平降低到 0.2 EU (endotoxin unit，約 0.1 ng LPS)/mL 以下。

3. 適用范圍廣，可用于 DNA、RNA、蛋白質或其他生物樣品。

4. 不影響 DNA 和絕大部分蛋白質的活性，處理過的質粒 DNA 可用于轉染實驗。

5. 既可小規(guī)模使用(在 1.5 mL 離心管內(nèi))，也可放量使用。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 塑料袋包裝 
液相內(nèi)毒素清除劑 60607 25 mL 使用手冊 60607sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期兩年。

自備試劑 無內(nèi)毒素的水或 TE 緩沖、3M 醋酸鈉、乙醇 

使用方法

 如果使用前本產(chǎn)品有分層，請冰浴后振蕩混勻。

一：用于體積小于 500 uL 的 DNA/RNA 樣品

1. 在一干凈的離心管中加入 500 uL 的樣品。如果不足 500 uL,可以用水或 TE補足。

2. 加入 50 uL 的 3 M 醋酸鈉（pH 5.2），混勻后冰浴 5 分鐘。

3. 加入 50 uL 預冷的本產(chǎn)品，充分混勻后冰浴 10 分鐘。

4. 65℃水浴直到溶液變濁或出現(xiàn)分層為止（一般需要 1-5 分鐘）。

5. 室溫 12000-15000×g 離心 2 分鐘(不能低溫離心)，離心后上層為無色透明，下層為淡藍色。

6. 將上清轉移到新的離心管中。

7. 如果需要，可以重復步驟 3～6。

8. 加 1 倍體積的異丙醇或兩倍體積的乙醇，混勻, 12000-15000×g 離心 30分鐘。

9. 棄上清后用 70%酒精洗 2 次。

10. 空氣干燥沉淀后加入 100 uL 無內(nèi)毒素的水或 TE 緩沖液溶解沉淀。

11. 測定 DNA 和內(nèi)毒素的含量，與未純化的樣品比較。

二：用于體積大于 500 uL 的 DNA/RNA 樣品

整個操作同上，只是在 15 或 50 mL 塑料離心管中進行，離心速度不能超過離心管的承受力。

三：整合到堿變性法質粒 DNA 制備過程中

整個操作同上，只是：

1. 樣品必須是加溶液 III 離心后得到的上清液或后得到的質粒溶液。

2. 如果處理的是加溶液 III 離心后得到的上清液，可以略去第 2 步操作。

3. 處理后的溶液需要用試劑盒提供的或自備的上柱液調整鹽離子濃度，然后上柱，以后的操作按試劑盒提供的操作手冊進行。

4. 洗脫 DNA 所用水或溶液必須無內(nèi)毒素污染。

四：對蛋白質和其它生物樣品

整個操作同上，只是：

1．略去第 2 步操作，加 3 M 醋酸鈉（pH 5.2）的目的是為沉淀核酸。

2．第 4 步改為 37℃保溫以免蛋白質變性，溶液呈混濁狀或分相一般需要 20-30分鐘。

3．略去第 8 步和以后操作。