中文名稱:大提無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout | 英文名稱:Endo-free Max Column Plasmid DNAout |
保存條件: 常溫運(yùn)輸和保存 | 純度規(guī)格: 99.99% |
產(chǎn)品類別: 分子生物學(xué) DNA純化 |
大提無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是整合北京基因經(jīng)典法大提質(zhì)粒DNAout和菌體內(nèi)毒素清除劑兩產(chǎn)品而成。菌體內(nèi)毒素清除劑是基因推出的產(chǎn)品,在質(zhì)粒提取前就把細(xì)胞壁上的內(nèi)毒素清除掉,徹底避免了目前通用的先提取 DNA+內(nèi)毒素混合物,再?gòu)闹屑兓|(zhì)粒 DNA 的弊端。用本產(chǎn)品提取的質(zhì)粒 DNA,內(nèi)毒素的污染濃度低,適合于轉(zhuǎn)染等對(duì)內(nèi)毒素的污染敏感的實(shí)驗(yàn)。
1. 操作簡(jiǎn)單,只在經(jīng)典的柱式質(zhì)粒 DNA 提取前,增加菌體內(nèi)毒素清除一步。
2. 去內(nèi)毒素效果好,處理一次可以去除 99%以上的內(nèi)毒素。
3. 質(zhì)粒丟失少,產(chǎn)率只比柱式質(zhì)粒 DNAout 低 5-10%,效果好于先提質(zhì)粒DNA,再用液相內(nèi)毒素清除劑處理的方法。
4. DNA 可以直接用于轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分 注意:本產(chǎn)品為菌體內(nèi)毒素清除劑(90901)和大提質(zhì)粒 DNAout(80912) 兩獨(dú)立產(chǎn)品的組合。
成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 菌體內(nèi)毒素清除劑 90901 200 mL 溶液 A 60205a 26 mL 溶液 B 60205b 26 mL 溶液 C 60205c 36 mL RNase A 溶液(10 mg/mL) 3160 0.6 mL 大提離心吸附柱 90303 5 套 通用洗柱液 60408 50 mL×2 DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 81107sc 1 份
運(yùn)輸及保存 RNase A 溶液需要低溫運(yùn)輸、-20℃保存,其余成分可常溫運(yùn)輸、室溫或保存,如有沉淀可加熱溶解后再使用。
自備試劑 50 mL 收集管
使用方法
1. 用 50 mL 塑料離心管收集不超過(guò) 40 mL 的 E.coli 飽和菌液,5,000 rpm離心 5-10 分鐘,棄上清,得到細(xì)菌沉淀。
2. 加入 10 mL 菌體內(nèi)毒素清除劑,溫和混勻后 5,000 rpm 離心 5-10 分鐘,棄上清(含內(nèi)毒素)。一次洗滌可以去除細(xì)菌表面 99%的內(nèi)毒素。
3. 再重復(fù)上述操作 1-3 次,得到的菌體將丟失了絕大部分細(xì)胞表面的內(nèi)毒素。
4. 往細(xì)菌沉淀中加入 5 mL 溶液 A(一次使用時(shí)需要將 RNase A 溶液全部加入并混合均勻,未用完的部分放 4℃保存),充分振蕩懸浮。注意:充分重懸細(xì)胞沉淀(無(wú)塊狀物)對(duì)于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。
5. 加 5 mL 溶液 B,溫和翻轉(zhuǎn) 10 余次至透明。若混合液不透明,應(yīng)減少細(xì)菌的用量或室溫放置 5-10 分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩,否則細(xì)菌基因組 DNA 將斷裂為小片段,與質(zhì)粒難以分離,污染質(zhì)粒 DNA。
6. 加入冰浴的 7 mL 溶液 C,顛倒混勻,冰上放置 10 分鐘?;旌衔镏袑⒂邪咨鯛钗镄纬?。注意不要過(guò)分振蕩。
7. 6000 rpm 離心 10 分鐘。如果離心管承受能力強(qiáng),離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。
8. 將上步得到的上清液移入到大提離心吸附柱中,放入 50 mL 收集管中。室溫放置 5 分鐘左右以便讓質(zhì)粒 DNA 跟膜結(jié)合。
9. 6000 rpm 離心 5 分鐘,質(zhì)粒 DNA 將與大提離心吸附柱中的膜結(jié)合。棄穿透液。
10. 將 10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中,室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm離心 5 分鐘,棄穿透液。
11. 重復(fù)上步一次。
12. 室溫 6000 rpm 空甩 5 分鐘,棄穿透液。注意:此步很重要,不能跳過(guò),否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
13. 將大提離心吸附柱放入一個(gè)干凈的 50 mL 塑料離心管中,加 0.5 mL DNA洗脫液 2.0(洗脫液如加熱到 50-65℃效果更佳),室溫靜置 2 分鐘后6000rpm 離心 5 分鐘,收集液即是質(zhì)粒 DNA 溶液。
14. 重復(fù)上步 3-4 次可洗脫更多的質(zhì)粒 DNA。DNA 洗脫液 2.0 不夠可以用 TE或超純水替代。
15. 合并所得質(zhì)粒 DNA,立即使用或-20℃儲(chǔ)存。
成立日期 | 2016-08-08 (9年) | 注冊(cè)資本 | 100萬(wàn)元整 |
員工人數(shù) | 1-10人 | 年?duì)I業(yè)額 | ¥ 100萬(wàn)以內(nèi) |
主營(yíng)行業(yè) | 生物化工,有機(jī)原料,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料,技術(shù)服務(wù) | 經(jīng)營(yíng)模式 | 貿(mào)易,試劑,定制,服務(wù) |
產(chǎn)品名稱 | 價(jià)格 | 公司名稱 | 報(bào)價(jià)日期 | |
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¥390 |
VIP6年
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2024-12-20 | |
詢價(jià) |
VIP4年
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上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
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2024-12-23 | |
¥100 |
南京江苑生物科技有限公司
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2024-12-23 | ||
¥220.00 |
VIP9年
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北京索萊寶科技有限公司
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2024-12-23 |