痰液DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

痰液是重要的臨床樣品，可以用于診斷肺癌，肺結(jié)核等各種疾病。但是從痰液中純化 DNA 十分棘手，為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，專用于從痰液或其他上呼吸道分泌樣品中純化 DNA，用于后續(xù)的分子生物學(xué)分析。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 每次可以處理 10-20 mL 痰液，得到 2-5 ug DNA。

2. 純度高,可直接用于后續(xù)得 PCR 檢測(cè)。

3. 一管式操作，減少污染，節(jié)約成本。

4. 含痰液保存液（溶液 A），便于取樣和運(yùn)輸。

5. 無(wú)毒環(huán)保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有機(jī)溶液。
規(guī)格及成分 成 份 50 次大紙盒包裝 
溶液 A（痰液細(xì)胞固定液） 500 mL 溶液 B（痰液解稠劑） 500 mL 溶液 C 30 mL 使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑 異丙醇，70%乙醇。

使用方法 

一：痰標(biāo)本的獲取與保存（注意：痰液以及下列操作的廢棄液都可能含有致病性的結(jié)核桿菌等致病菌，需按傳染源相關(guān)規(guī)定流程進(jìn)行操作）

1. 每例患者在常規(guī)痰標(biāo)本采樣時(shí)，好連續(xù)三天采集三次樣品以防誤差。具體做法是先在每個(gè) 50 mL 的痰液收集管內(nèi)新鮮加入 10 mL 溶液 A 和 10 mL 溶液 B，待患者晨起漱口后，咳深部痰 7～8 口（約 10-20mL），收集到裝有溶液 A 和溶液 B 混合液的痰液管收集內(nèi)，混勻后儲(chǔ)于 4℃冰箱或陰涼處。第二、三天重復(fù)此操作。取足三管后一起送實(shí)驗(yàn)室，4℃冰箱保存直到使用（一般不超過(guò) 7 天）。

2. 使用時(shí)，在室溫反復(fù)振搖裝有樣品（總體積約 30-40 mL）的痰液收集管 5～10 分鐘，充分混勻直到痰液中無(wú)粘稠痰塊而呈均勻的液相。

3. 4℃2500g 離心 5 分鐘，棄上清。

4. 沉淀再用自備的 PBS 液洗兩遍。

5. 所得沉淀可以直接用于涂片，用于比較細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析。也可以將細(xì)胞沉淀在 0.2mLPBS 緩沖液中重懸后轉(zhuǎn)入 1.5 mL 螺旋蓋塑料離心管，-20℃冰箱長(zhǎng)期保存，或立即用于下步的 DNA 提取。為避免蓋子崩開而出現(xiàn)交叉污染或痰液的分枝桿菌污染環(huán)境，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。同時(shí)好設(shè)置一個(gè)陽(yáng)性和一個(gè)陰性對(duì)照。

二：DNA 提取

6. 在上步所得的 0.2 mL 樣品中加入 0.6 mL 溶液 C。溶液 C 容易形成沉淀，用前需37℃加熱融化并搖晃均勻。

7. 室溫放置 10 分鐘。此間可以在每個(gè)管外壁上做個(gè)標(biāo)記，以在下步區(qū)別向心面和離心面。

8. 振蕩數(shù)秒后加入 0.7 mL 自備的異丙醇，旋緊蓋后振蕩 30 秒混勻。

9. 把離心管的向心面對(duì)向轉(zhuǎn)頭，13,000-15,000 g 室溫離心至少 15 分鐘。

10. 小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的 DNA 沉淀（此時(shí)可能看不見）。

11. 加入 1.0 mL 70%乙醇, 振蕩數(shù)秒后 15,000 g 室溫離心 5 分鐘。注意：在離心機(jī)中放置離心管時(shí)將其向心面對(duì)向轉(zhuǎn)頭的中央。

12. 小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的 DNA 沉淀（此時(shí)呈膜狀沉淀）。

13. 將離心管放回離心機(jī)再短暫離心數(shù)秒, 然后用移液器移棄約 50 uL 殘留液體（70%乙醇），否則它會(huì)影響后續(xù)反應(yīng)。

14. 加入 200 μl RNase-free 水，用移液槍仔細(xì)吹打離心管管底和管壁離心面的膜狀DNA 沉淀，溶液將呈混濁狀，含少量不溶，短暫離心后存上清（含 DNA）。

15. 直接取適量用于 PCR，樣品使用量不超過(guò) PCR 體系的 1/2。剩余 DNA 樣品可以室溫放置 2 小時(shí)，也可保存于-80℃保存一個(gè)月。