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免RNA提取RT-PCR試劑盒,Cell Lysate RT-PCR Kit
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免RNA提取RT-PCR試劑盒

價(jià)格 2900
包裝 100次
最小起訂量 100次
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:免RNA提取RT-PCR試劑盒英文名稱:Cell Lysate RT-PCR Kit
保存條件: -20℃純度規(guī)格: 99.9%
產(chǎn)品類別: 分子生物試劑 核酸擴(kuò)增
2024-12-25 免RNA提取RT-PCR試劑盒 Cell Lysate RT-PCR Kit 100次/2900RMB 2900 -20℃ 99.9% 分子生物試劑 核酸擴(kuò)增

免RNA提取RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是一種免 RNA 提取的 RT-PCR 試劑盒,它使用精心優(yōu)化的細(xì)胞裂解液直接裂解培養(yǎng)細(xì)胞,然后直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行 RT,再用 cDNA 進(jìn)行 PCR或熒光定量 PCR。本產(chǎn)品特點(diǎn)如下:

1. 免 RNA 提取,從細(xì)胞裂解到 RT-PCR 或?qū)崟r(shí)定量 RT-PCR 結(jié)果只需三個(gè)步驟,省略了整個(gè) RNA 提取過(guò)程。

2. 靈敏度不低于常規(guī)方法(先提總 RNA 再進(jìn)行 RT-PCR),不但可以檢測(cè)到低拷貝的 RNA,還可用于檢測(cè) miRNA。

3. 整合了去除基因組 DNA 的步驟,只檢測(cè) RNA,無(wú)需擔(dān)心基因組 DNA 的污染。

4. 每次只需要 10-100000 個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞或含相應(yīng)細(xì)胞數(shù)的痕量組織(如 LCM樣品),驗(yàn)證過(guò)的細(xì)胞包括 Hela、CHO、293、COS-7 等,但不能用于U937 細(xì)胞系。

5. 兩步法 RT-PCR,后續(xù)使用靈活。得到的 cDNA 既可用于普通 PCR,也可用于基于 SYBR 的熒光定量 PCR,也可用于其他定量 PCR(如 TaqMan),非常靈活。

6. 即適用于少量樣品,也適用于平行處理大量樣品及高通量篩查。

7. 本產(chǎn)品足夠用于 50 次 20µL 體系的 RT 和 600 次 30µL 體系(或約 200 次100µL 體系)的 PCR。
免RNA提取RT-PCR試劑盒
規(guī)格及成分 成 分 編 號(hào) 十孔盒包裝
溶液 A 130957a 25 mL
溶液 B 130957b 0.5 mL
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (含 RI) 60906a 100 µL
RT Buffer(含 dNTP) 60906b 300 µL
PCR MagicMix 3.0(含染料) 90805 9 mL
RNase-free 水 80403 10 mL
使用手冊(cè) 130957sc 1 份

免RNA提取RT-PCR試劑盒運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期兩年。

自備試劑 RT 引物、PCR 引物對(duì)

使用方法注意:無(wú) RNase 的環(huán)境和使用無(wú) RNase 污染的試劑是本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。 強(qiáng)烈建議使用的固相 RNase 清除劑去除工作臺(tái)面的 RNase,用氣相 RNase 去除空氣中的 RNase。實(shí)驗(yàn)前需要將 95%乙醇放-70℃預(yù)冷,用空 槍頭盒盛乙醇。

一、細(xì)胞培養(yǎng)、裂解

1. 按常規(guī)方法培養(yǎng)細(xì)胞、胰酶消化并計(jì)數(shù)。

2. 轉(zhuǎn)移 1×10E5 個(gè)細(xì)胞到離心管中,400×g 離心 4 分鐘。

3. 吸棄上清(即培養(yǎng)基),保留細(xì)胞沉淀。

4. 用 0.5 mL 溶液 A 重懸細(xì)胞,并將細(xì)胞濃度調(diào)整到 2×10E5 細(xì)胞/mL。

5. 轉(zhuǎn)移 10 µL 的懸浮細(xì)胞到 0.2 mL PCR 管中,并加入 10 µL 的溶液 B,此 時(shí)細(xì)胞終濃度為 10E5 細(xì)胞/mL。

6. 迅速將離心管插入浮子中,放入-70℃預(yù)冷的、95%乙醇中 1-3 分鐘。10 µL 槍頭盒一般能讓 0.2 mL 的 PCR 管一半沒(méi)入到乙醇中。

7. 在室溫的水浴鍋中快速解凍細(xì)胞,渦旋 10 秒后短暫離心數(shù)秒,將管中液體 (細(xì)胞裂解液)轉(zhuǎn)移到新的離心管中,放冰上待用。

二、RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA

8. 按下表設(shè)置 RT 反應(yīng)體系(以 20 µL 體系為例):

成分 樣品管 陰性對(duì)照管 細(xì)胞裂解液(含 RNA) 2.5 µL 2.5 µL RT Buffer(含 dNTP) 6 µL 6 µL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI) 2 µL 無(wú) RT 引物(100ng/µL) 1 µL 1 µL RNase-free 水 補(bǔ)水到 20 µL 補(bǔ)水到 20 µL

9. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

10. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作 為 PCR 模板使用,不需要純化。也可以放置在-20℃長(zhǎng)期保存。 三、PCR 方案一(RT 產(chǎn)物全部用于 PCR)

11.在上步的 RT 反應(yīng)管中直接按下表加入各成分(以 100 µL 體系為例): 成分 每管加入量 PCR MagicMix 3.0(已加染料) 50 µL 自備正向 PCR 引物 (100 ng/µL) 2 µL RNase-free 水 補(bǔ)水到 100 µL

12.直接進(jìn)入第 14 步。

四、PCR 方案二(部分 RT 產(chǎn)物用于 PCR)

13.按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)體系(以 30 µL 體系為例):

成分 每管加入量

PCR MagicMix 3.0(已加染料) 15 µL

cDNA 樣品(RT 反應(yīng)產(chǎn)物) 1-5 µL

自備正向 PCR 引物 (100 ng/µL) 1 µL

自備反向 PCR 引物 (100 ng/µL) 1 µL

RNase-free 水 補(bǔ)水到 30 µL

注意:RT 引物可以用做反向 PCR 引物。

14. PCR 反應(yīng)參數(shù)(需要根據(jù)模板和引物 Tm 值決定,下面的參數(shù)只做參考):

過(guò)程 溫度 時(shí)間

預(yù)變性 94℃ 5 min

PCR 反應(yīng)

(35 個(gè)循環(huán))

94℃ 1 min

55℃ 1 min

72℃ 2 min

最后延伸 72℃ 10 min

四、電泳檢測(cè)

15.取 5-10 µL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳,跟分子量標(biāo)準(zhǔn)比較估計(jì)出擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。注:本試劑盒中的 PCR mix 含有甘油和染料,可以直接上樣,不需要額外再加電泳上樣液。

關(guān)鍵字: 免RNA提取RT-PCR試劑盒廠家;免RNA提取RT-PCR試劑盒現(xiàn)貨

公司簡(jiǎn)介

上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾?,并在北京、廣東,江西,吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。
成立日期 2015-05-29 (10年) 注冊(cè)資本 100萬(wàn)元整
員工人數(shù) 50-100人 年?duì)I業(yè)額 ¥ 100萬(wàn)以內(nèi)
主營(yíng)行業(yè) 中間體,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料 經(jīng)營(yíng)模式 工廠
  • 上??道噬锟萍加邢薰?/span>
VIP 6年
  • 公司成立:10年
  • 注冊(cè)資本:100萬(wàn)元整
  • 企業(yè)類型:廠家
  • 主營(yíng)產(chǎn)品:主營(yíng)產(chǎn)品:ELISA試劑盒、重組蛋白、抗體、生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)等科研用品
  • 公司地址:松江區(qū)新橋鎮(zhèn)賣新公路2077號(hào)3089室
詢盤(pán)

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