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DNA探針變性液,DNA Probe Denaturation Solution
  • DNA探針變性液,DNA Probe Denaturation Solution

DNA探針變性液

價(jià)格 290
包裝 10mL
最小起訂量 10mL
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-23
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:DNA探針變性液英文名稱:DNA Probe Denaturation Solution
保存條件: 常溫運(yùn)輸和保存純度規(guī)格: 99.9%
產(chǎn)品類別: 分子生物試劑 探針標(biāo)記及檢測(cè)
2024-12-23 DNA探針變性液 DNA Probe Denaturation Solution 10mL/290RMB 290 常溫運(yùn)輸和保存 99.9% 分子生物試劑 探針標(biāo)記及檢測(cè)

DNA探針變性液
產(chǎn)品及特點(diǎn)雜交反應(yīng)進(jìn)行時(shí),探針和靶核酸都必須是單鏈的。如果用雙鏈 DNA 探針 進(jìn)行雜交(包括檢測(cè) RNA 時(shí)),雙鏈 DNA 探針在雜交前必須進(jìn)行變性。本 產(chǎn)品就是即用型的 DNA 探針變性液,專門針對(duì) DNA 探針在雜交前進(jìn)行變性 處理。本產(chǎn)品特點(diǎn)如下:

1. 即開即用。

2. 使用方便快捷,可用于核酸雜交。 
DNA探針變性液
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 10 mL 塑料袋包裝
本產(chǎn)品 131208 10 mL
使用手冊(cè) 1 份

DNA探針變性液運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。

自備試劑 印跡膜、標(biāo)記探針、6×SSC、2×SSC、0.1×SSC、超級(jí)雜交液、Tris-Cl 溶液(1 M,pH 7.2)、HCl 溶液(0.4 M)

使用方法一、根據(jù)探針和靶分子的不同,分別按下面不同情況計(jì)算雜交分子的 Tm 值

1. 對(duì) DNA-DNA 雜交,其 Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+ ] + 0.41×GC% –500/L 說明:L 是探針或靶分子的長度(用兩者中最短的一個(gè)) GC%是探針或靶分子中的 GC 百分比(用兩者中最短的一個(gè)) Na+ 濃度是超級(jí)雜交液中 Na+ 的濃度,為 0.75 M,16.6×log10[Na+ ]= (-2.07) 2. 對(duì) DNA-RNA 雜交,其 Tm 值比 DNA-DNA 的 Tm 值要高 10-15℃。 3. 對(duì) RNA-RNA 雜交,其 Tm 值比 DNA-DNA 的 Tm 值要高 20-25℃。 4. 對(duì) Oligo 探針雜交,Tm=GC 數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃。

二、確定雜交溫度(預(yù)雜交溫度跟雜交溫度應(yīng)該一樣)

1. 對(duì)于大于 200 bp 的 DNA-DNA 雜交,雜交溫度一般比 Tm 低 15-25℃,一般選擇 68℃。

2. 對(duì) RNA-RNA 或 DNA-RNA 雜交,雜交溫度一般比 Tm 低 15-25℃。 如果這樣計(jì)算出的雜交溫度很高(如高于 70℃),則 RNA 容易降解,所 以選用含甲酰胺的超級(jí)雜交液(超級(jí)雜交液 B 型),以便能在 42℃ 完成雜交。

3. 對(duì) Oligo 探針的雜交,雜交溫度一般比 Tm 低 5℃。由于 Oligo 較短, 更容易受各種因素影響(如錯(cuò)配率、修飾堿基比例等),所以溫度需 要適度摸索和優(yōu)化。

三、確定洗膜溫度

一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

四、預(yù)雜交步驟

預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。 1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。

2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。

3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。

五、雜交步驟

1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。

2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。

3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。

六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡膜干燥。 此步是將與印跡膜非特異結(jié)合的探針分子洗去而只留下特異結(jié)合的探針 分子。由于非特異性雜交的雜交分子解鏈溫度較低,熱穩(wěn)定性較差,在一定的 溫度和較低的離子強(qiáng)度下,即可洗掉。

1. 雜交完畢,取出塑料袋,剪去一角,倒出所有的含探針的雜交液。此含探 針的雜交液可以多次使用再倒棄。

2. 剪開雜交袋,用鑷子取出印跡膜,浸沒于大量的 2×SSC(含 0.5 % SDS) 溶液中,室溫下振蕩漂洗 15 分鐘。

3. 重復(fù)上步操作一次。

4. 將印跡膜轉(zhuǎn)移至 0.1×SSC(含 0.1% SDS)溶液中,在計(jì)算好的洗膜溫 度下振蕩漂洗 30 分鐘至 1 小時(shí)。

5. 重復(fù)上步操作一次。如果是同位素標(biāo)記探針,則需要重復(fù)至用蓋革計(jì)數(shù)器 在無核酸區(qū)域檢測(cè)不出放射信號(hào)為止。

6. 將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上,吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測(cè)。

關(guān)鍵字: DNA探針變性液廠家;DNA探針變性液現(xiàn)貨

公司簡介

上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾#⒃诒本?、廣東,江西,吉林等全國30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。
成立日期 2015-05-29 (10年) 注冊(cè)資本 100萬元整
員工人數(shù) 50-100人 年?duì)I業(yè)額 ¥ 100萬以內(nèi)
主營行業(yè) 中間體,化學(xué)試劑,醫(yī)藥原料 經(jīng)營模式 工廠
  • 上??道噬锟萍加邢薰?/span>
VIP 6年
  • 公司成立:10年
  • 注冊(cè)資本:100萬元整
  • 企業(yè)類型:廠家
  • 主營產(chǎn)品:主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒、重組蛋白、抗體、生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)等科研用品
  • 公司地址:松江區(qū)新橋鎮(zhèn)賣新公路2077號(hào)3089室
詢盤

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