超快DNA-RNA兩用轉(zhuǎn)膜試劑盒
產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品是基于毛細管轉(zhuǎn)膜法的 Southern 和 Northern 印跡膜制備試劑, 專門用于從電泳得到的凝膠中制備用于 Southern 雜交和 Northern 雜交的 印跡膜。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,提供制備 5 次 Southern 或 Northern 轉(zhuǎn)膜(13×20cm)所 需要的轉(zhuǎn)膜液。
2. 快速:轉(zhuǎn)膜過程只需要 1 小時,整個過程(加上變性和中和等步驟)只 需要 2.5 小時(對 DNA)或 1.5 小時(對 RNA)。
3. 跟硝酸纖維素膜、帶電尼龍膜、中性尼龍膜和 PVDF 膜兼容。包括Nytron、 Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon 等。
4. 硝酸纖維素膜適用于最小長度在 400bp 以上的靶分子,帶電尼龍膜適用 于最小長度在 40bp 以上的靶分子。
5. 使用優(yōu)化的下向轉(zhuǎn)膜法,不但效率比上行轉(zhuǎn)膜法高 30%左右,而且條帶 彌散度低、分辨率高。
6. 可用瓊脂糖膠(包括脈沖電泳膠,DNA 電泳、RNA 甲醛膠電泳和 RNA 戊二醛電泳)和 DNA PAGE 膠。
超快DNA-RNA兩用轉(zhuǎn)膜試劑盒
規(guī)格及成分 成份 編號 大紙盒包裝
成分 A 121110A 660 g
溶液 B 121110B 100 mL
中和液 121110C 50 mL×5
使用手冊 121110sc 1 份
超快DNA-RNA兩用轉(zhuǎn)膜試劑盒運輸及保存 常溫運輸及保存,有效期 1 年。
自備試劑 瓊脂糖電泳試劑、去離子水、印跡膜(硝酸纖維素膜或尼龍膜)
使用方法 一:Southern 印跡膜的制備(DNA 轉(zhuǎn)膜,中性尼龍膜,硝酸纖維素膜)
1. 按常規(guī)方法進行電泳(包括脈沖電泳),本試劑盒不提供電泳所需試劑。如果進行常規(guī)的 Southern 雜交,建議使用 0.7%瓊脂糖進行電泳,分離酶切的基因組 DNA。電泳時加電泳分子量對照、酶切對照(先將標(biāo)記的全長 lambda DNA 或探針質(zhì)粒與樣品 DNA 的混合,再酶切)、陰性樣品(不含 檢測片段 的 DNA 樣 品)、雜 交分子量 對照(標(biāo) 記的lambda/Hind III)等。電泳后和熒光標(biāo)尺并排拍照。
2. 變性:首次使用時需配制變性液 2.5L(在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約2L 自備的去離子水,攪拌緩慢中加入 220g 成分 A 和 100 mL 溶液 B,溶解后定容到 2.5L 后即可用),將凝膠轉(zhuǎn)移到一個至少含 10 倍于膠體積的變性液中,脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 60 分(如果使用帶正電尼龍膜,此步處理可以縮短到 30 分鐘)。未用完的變性液可放瓶中室溫保存。
3. 配制轉(zhuǎn)膜液:如果使用帶正電的尼龍膜,則直接用上步配制的變性液轉(zhuǎn)膜如果使用中性尼龍膜和硝酸纖維素膜,則需配置轉(zhuǎn)膜液(在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約 2L 自備的去離子水,緩慢攪拌中加入 440g 成分 A 和 2mL 溶液 B,溶解后定容到 2.5L 后即可用)。將凝膠轉(zhuǎn)移到至少 10 倍于凝膠體積的轉(zhuǎn)膜液中,脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 15 分。
4. 設(shè)置轉(zhuǎn)膜體系:測量凝膠的大小,然后借助尺子準(zhǔn)確切出一張印跡膜,每邊比凝膠大 1mm,并切去一角,將印跡膜漂浮于去離子水上 20 分鐘確保全部濕潤,再按下圖設(shè)置下行轉(zhuǎn)膜體系(比上行轉(zhuǎn)膜體系效率高 30%)。圖中 membrane 即印跡膜,transfer buffer 即轉(zhuǎn)膜液,吸水濾紙厚度為 2-3cm,一般按每 cm2 印跡膜需要 1 mL 轉(zhuǎn)膜液的比例準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜液。對大的凝膠,可以同時使用兩張濾紙分別跟兩個容器的轉(zhuǎn)膜液連接以便使轉(zhuǎn)膜勻漿。
5. 洗膠:凝膠轉(zhuǎn)移到一個含至少 10 倍于膠體積的轉(zhuǎn)膜液中,脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 15 分。
6. 轉(zhuǎn)膜:常溫轉(zhuǎn)膜 1 小時。結(jié)束后用鉛筆標(biāo)記印跡膜的核酸結(jié)合面以免搞錯。注意:不要過夜轉(zhuǎn)膜,否則信號將降低 50%。
7. 中和:將印跡膜在中和液中處理 10 分鐘,中和液的用量至少為 0.5mL/cm2印跡膜。中和液容易長細菌,不建議長期放置。
8. 檢測效果:可將凝膠放入 EB(0.5ug/mL)溶液中染色 30 分鐘后 UV下觀察殘留核酸的量,反推轉(zhuǎn)膜效率。此步也可跳過。也可以另購印跡膜染液(CAT#:70104-100)處理印跡膜,日光下觀察轉(zhuǎn)膜效果。
9. 固定:將印跡膜夾在兩層濾紙中間 80℃干燥 15 分鐘以固定核酸(不需真空),干燥時間不需延長,否則雜交信號可能會降低。
10. 此時印跡膜可直接用于后續(xù)的核酸雜交實驗或者在干燥狀態(tài)下保存待用(可放數(shù)月)。
二:Southern 印跡膜的制備(帶正電尼龍膜,DNA 轉(zhuǎn)膜)
11. 電泳步驟同第 1 步。
12. 變性:同第 2 步,只是時間縮短到 30 分鐘。
13. 配制轉(zhuǎn)膜液:不需配制,直接用變性液轉(zhuǎn)膜。
14. 其余處理同第 4 步到第 10 步。
三:Northern 印跡膜的制備(RNA 轉(zhuǎn)膜)
15. 按常規(guī)方法進行電泳,本試劑盒不提供電泳所需試劑。本方法適用于甲醛變性膠和乙二醛變性膠,電泳后和熒光標(biāo)尺并排拍照。
16. 凝膠不需要變性和洗膠處理(也不能變性,否則 RNA 將會降解),電泳后直接進入轉(zhuǎn)膜步驟,完全按第 6 到第 10 步處理。
關(guān)鍵字: 超快DNA-RNA兩用轉(zhuǎn)膜試劑盒廠家;超快DNA-RNA兩用轉(zhuǎn)膜試劑盒現(xiàn)貨
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾?,并在北京、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。