普魯士藍(lán)染色試劑盒（中性紅法）

• RS4020
• 2×50mL/2×100mL
• 室溫保存，有效期1年。
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• Hemosiderin）是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵、金黃色，故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。

      Perls普魯士藍(lán)反應(yīng)（Prussian blue reaction）又稱為含鐵血黃素染色，即經(jīng)過亞鐵氰化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)會(huì)間質(zhì)內(nèi)，主要顯示三價(jià)鐵鹽。Perls普魯士藍(lán)是非常經(jīng)典的組織化學(xué)反應(yīng)，是顯示組織內(nèi)三價(jià)鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法，其染色原理為：亞鐵氰化鉀溶液使三價(jià)鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來，三價(jià)鐵與亞鐵氰化鉀反應(yīng)，生成一種不溶解的藍(lán)色化合物即三價(jià)鐵的亞鐵氰化物普魯士藍(lán)，所以該反應(yīng)被稱為普魯士藍(lán)反應(yīng)。三價(jià)鐵的亞鐵氰化物是一種很穩(wěn)定的化合物，在反應(yīng)后可用紅色染色劑進(jìn)行復(fù)染，如核固紅、伊紅、中性紅等。

Perls stain常用于顯示局部組織內(nèi)各種出血性病變，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)。在判斷含鐵血黃素沉積時(shí)，用Perls反應(yīng)可以得到證實(shí)，該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長(zhǎng)期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣、可以進(jìn)行復(fù)染。

1、10%的中性福爾馬林固定液

2、系列乙醇 

3、蒸餾水 

4、4%的多聚甲醛

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• 、 組織固定于10%中性福爾馬林，常規(guī)脫水包埋。
• 、切片厚度4um，常規(guī)脫蠟至水。
• 、蒸餾水洗1min.。
• 、切片入Perls stain（見注意事項(xiàng)4），浸染15～30min。
• 、蒸餾水充分沖洗2～5min 。
• 、入中性紅染色液，淡染細(xì)胞核15～30s。
• 、自來水沖洗1～5s。
• 、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。
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• 、 無需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗2～3min。
• 、 染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時(shí)間可以相應(yīng)縮短。
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• 、4%多聚甲醛固定10～20min。
• 、自來水沖洗2次，每次2min。
• 、蒸餾水沖洗2次，每次2min。
• 、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時(shí)間可以相應(yīng)縮短。
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含鐵血黃素或三價(jià)鐵   藍(lán)色

細(xì)胞核、其他組織     紅色

陰性對(duì)照（可選）

取相同連續(xù)切片脫蠟至水。置于5%的草酸中，孵育2～6h后，經(jīng)Perls stain，需要步驟同上。結(jié)果為陰性。

1. 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
2. 組織固定常采用10%的中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林長(zhǎng)期固定后，組織會(huì)有損傷。避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會(huì)妨礙鐵的保存。
3. 整個(gè)操作過程中容器要干凈，避免使用金屬鐵制品，洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜，因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。
4. Perls stain染色時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品情況調(diào)整著色時(shí)間。
5. 所有切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽性對(duì)照切片，選擇適合的對(duì)照非常重要。尸檢肺組織是一個(gè)很好的對(duì)照，包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)。

6、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
7、冰凍切片和細(xì)胞的染色，應(yīng)根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件。
8、為了您的健康和安全，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。