GelRed是靈敏、穩(wěn)定、對環(huán)境安全的熒光核酸染料,用來替代劇毒性的溴化 乙錠(EB),用于瓊脂糖凝膠中dsDNA, ssDNA 或 RNA 的染色。事實上GelRed和EB擁有相同的光譜,所以可以用GelRed直 接替代EB而不用更換現(xiàn)有的成像系統(tǒng)。另外,GelRed的靈敏度遠遠高于EB。 GelRed? 在Biotium經(jīng)過一系列的測試,并且通過3個獨立的測試服務公司評 估日常處理處置時染料的安全性。測試結果表明,染料對于手套和細胞膜都是 不能穿透的。在濃度遠高于凝膠染色工作濃度的情況下,染料是無細胞毒性和 非誘變性的。GelRed?成功通過了按照CCR標明的22項危險廢物特征的環(huán)境 安全測試,這項條例沒有將GelRed?分類為危險廢物。完整的安全檢測報告 可以在www.biotium.com網(wǎng)站上下載。
目前,大多數(shù)商業(yè)化的核酸凝膠染色試劑總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不能完全令人滿意。例如,EB 作為使用最廣泛的核酸凝膠染色試劑,能夠在多數(shù)應用中提供可以接受的靈敏度,但它是一種高誘變性的化學物質(zhì),且染色后背景熒光信號較高(圖1)。SYBR Green I 和SYBR Gold 也被宣傳為最靈敏的凝膠染色試劑。但SYBR Green I尤其是SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預制凝膠中會快速降解,穩(wěn)定性差導致染色效果極不可靠。SYBRsafe 被認為是市場上較為安全的核酸染料,但它的染色效果還遠不及SYBR Green I,且毒性依然較高(圖3)。GelRed和GelGreen無論用于預制凝膠染色還是凝膠電泳后染色,都表現(xiàn)出了極高的靈敏度。為配合312nm-UV凝膠成像系統(tǒng)而設計的GelRed,在使用了我們新開發(fā)的具有專利的試驗步驟后(該試驗步驟中使用稀釋的NaCl溶液替代傳統(tǒng)的TBE緩沖溶液),在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當于SYBR Gold。但與SYBR Gold 不同,GelRed 在預制凝膠中使用時仍然有極高的靈敏度。我們新開發(fā)的GelGreen 可以滿足使用488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見光激發(fā)的Dark Reader 的研究人員的使用要求。GelGreen 無論是在預制凝
膠還是凝膠電泳后染色中都與SYBR Green I 靈敏度相當,但不存在后者的穩(wěn)定性問題。實際上,GelRed 和GelGreen ,特別是GelRed非常穩(wěn)定,可以長期在室溫下保存。當這兩種染料稀釋在TBE或者類似的電泳緩沖溶液中時甚至可以使用微波爐加熱,便于采用常規(guī)方法制備預制凝膠。含有染料的預制凝膠可以成批制備,長期保存。同樣重要的是,GelRed 和GelGreen 相比EB 或SYBR Green 提高了安全性。獨立的測試服務公司(Litron Laboratories, Inc.)進行的標準艾姆斯氏測試結果表明,在18.5μg/mL(該濃度遠高于推薦用于電泳后染色的 約4μg/mL 的3X 染色液)濃度下,GelGreen沒有誘變性,而GelRed 也僅在S9 代謝活化時有微弱的誘變性。
GelRed 和GelGreen 的特殊化學結構使其難以穿透細胞膜進入細胞,正是這一特性降低了染料的細胞毒性。見圖3。
相反,SYBR?Green I 廣泛地用于活細胞線粒體和核DNA 染色,這正是由于它能快速的被細胞吞入。由于已知SYBR Green I 對紫外線導致的突變有強烈的增強作用(Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)),因此它的高細胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
圖1:GelRed 和EtBr預制膠染色(precast gel staining)對比圖。 瓊脂糖濃度為1%,緩沖液為TBE。四個泳道的加樣量從左至右分別為 200 ng, 100 ng, 50 ng and 25 ng。在300nm紫外燈下成像。結果顯示GelRed較EtBr有著更高的靈敏度和更低的本底色。
圖2. GelGreen (綠色)GelRed (紅色)在PBS 緩沖溶液中結合dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。
圖3:分別用1X SYBR Green 1、SYBR Safe、GelRed 和Gelgreen 在PBS 緩沖液中對Hela細胞染色5分鐘和30分鐘。成像結果表明Gelred和GelGreen染色劑幾乎沒有穿透細胞膜進入細胞內(nèi),而SYBR Green 1、SYBR Safe 則完全進入細胞內(nèi),并與核酸結合(綠色發(fā)光部分)。這充分證明GelRed和GelGreen具有極好的安全性。更詳細的安全檢測報告可以到www.biotium.com 官方網(wǎng)站下載。
特 性:
1、高靈敏度
GelRedTM 和GelGreenTM 是目前最靈敏的凝膠核酸染料
2、穩(wěn)定性極好
可隨預制膠直接加熱而不會降解;室溫下可長期保存
3、更安全
艾姆斯氏試驗結果表明,該染料的誘變性遠小于溴化乙錠,其水溶性包裝產(chǎn)品通過美國環(huán)保標準的安全測試
4、廣泛的適應性
適用于預制凝膠染色和凝膠電泳后染色
5、染色過程簡單
預制膠和電泳過程中不必擔心染料降解;電泳后染色也僅需30 分鐘,因本底色極低而無需脫色或沖洗
6、對DNA 和RNA 的遷移影響極小
對核酸遷移的影響小于SYBR Green I
7、與標準凝膠成像系統(tǒng)及可見光激發(fā)的觀察裝置完美兼容
使用312nm 激發(fā)的UV 凝膠成像系統(tǒng)時,GelRedTM 可以完美替代EB;使用254nm 激發(fā)的UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時,GelGreenTM 足以替代任意一SYBR染料
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溫馨提示:不可用于臨床治療。