細(xì)胞系
溶解方法
可以溶于DMSO或DMF。
反應(yīng)時間
50 mM，25℃ 反應(yīng)1 h
應(yīng)用
用DMSO配置濃度為50mM的biotin-HPDP，然后用DMF 將其稀釋成終濃度為4 mM的溶液。蛋白樣品溶液與biotin-HPDP溶液體積比按照1：3混合后25℃孵育1小時，最后用抗壞血酸溶液（50mM）(抗壞血酸：蛋白樣品=1:50)來終止反應(yīng)。隨后，多余的biotin-HPDP可以通過加入兩倍體積的丙酮（-20℃）在20℃下孵育20min去除。每毫克蛋白加入15ul的鏈霉親和素瓊脂糖來純化生物素化蛋白，室溫孵育1h。用10倍體積含NaCl的中性緩沖液清洗磁珠，每次洗脫間隙室溫200g離心5秒。用洗脫液與磁珠孵育回收結(jié)合的蛋白。用SDS-PAGE以及特定的抗體來分析感興趣的蛋白。
動物模型
劑量
注意事項
References:
[1.][1].Samie R. Jaffrey and Solomon H. Snyder. The Biotin Switch Method for the Detection of S-Nitrosylated Proteins. Science’s stke.2015.
Biotin-HPDP，一個巰基反應(yīng)性的生物素化試劑，是一種水不溶性的試劑，在加入反應(yīng)性水溶液之前需要在合適的溶劑中溶解，包括二甲基亞砜（DMSO）和二甲基甲酰胺（DMF）。Biotin-HPDP由一個雙環(huán)生物素環(huán)結(jié)構(gòu)，一個附著在生物素戊酸側(cè)鏈上的1,6-二氨基己烷和一個側(cè)鏈末端的巰基反應(yīng)性基團(tuán)共同組成。Biotin-HPDP末端的吡啶基二硫化物能夠與蛋白或其它分子上的游離巰基反應(yīng)形成二硫鍵，并釋放吡啶-2-硫酮。Biotin-HPDP的長側(cè)鏈?zhǔn)沟蒙锼貥?biāo)記的分子能夠更好的與親和素（avidin）或鏈霉親和素（streptavidin）探針結(jié)合。
參考文獻(xiàn)：Bioconjugate Techniques , 2nd ed.? By Greg T.Hermanson ?(Pierce Biotechnology, Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL). ?Academic Press ?(an imprint of Elsevier): ?London, Amsterdam, Burlington, San Diego . 2008. ISBN 978-0-12-370501-3.
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