名稱(chēng)：DAPI溶液（即用型）

存儲(chǔ)：-20℃，有效期至少2年

 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

DAPI，也稱(chēng)DAPI dihydrochloride，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和460nm。

DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。

Phygene的DAPI染液分為即用型（10ug/ml）與濃縮液（濃度為1mg/ml）。即用型工作液無(wú)需稀釋?zhuān)梢灾苯佑糜诠潭?xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，可以滿(mǎn)足各種常規(guī)染色的需要。濃縮液使用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)不同直接將本產(chǎn)品用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度。

使用方法

1.固定的細(xì)胞或組織染色：對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。

a) 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

b) 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。

2.活細(xì)胞或組織染色：

a) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。

b) 在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm

注意事項(xiàng)

1）DAPI被普遍認(rèn)為具有致癌性，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免交叉污染。

2）本產(chǎn)品需避光，并盡量避免反復(fù)凍融。

3）熒光染料都存在淬滅問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

4）為減緩熒光淬滅可以使用我們抗熒光衰減封片劑。