名稱 蛋白快速銀染試劑盒（Protein Fast Silver Stain Kit）
規(guī)格 20T

試劑組分 

試劑(A): Silver Stain Sensitizer(500×) ----2x1ml----RT
試劑(B): Silver Stain(100×)----10ml----RT 避光
試劑(C): Silver Stain Developer(5×)----2×200ml----RT 避光
試劑(D): Silver Stain Stop Buffer(10×)----100ml----RT  


 
自備材料：

1、 水平搖床或側(cè)擺搖床
2、 去離子水(超純)
3、 乙醇、冰乙酸


注：有效期12個月


產(chǎn)品簡介 

蛋白快速銀染試劑盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一種快速的可用于 SDS-PAGE 或非變性 PAGE 等蛋白銀染染色的試劑盒，該試劑盒含有增敏步驟，可明顯降低背景。其優(yōu)點還在于：1、操作簡單、快速；2、可用于 2D 凝膠的銀染，并可進行后續(xù)的質(zhì)樸檢測；3、目的條帶清晰；4、不含甲醇。

Protein Fast Silver Stain Kit 不 Protein Silver Stain Kit 相比，前者操作速度更快，當檢測靈敏度可能低于后者，尤其是在檢測小分子量蛋白質(zhì)的時候。

本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。


使用說明 

操作步驟(僅供參考)：

1、 準備工作：以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例，以凝膠全部浸沒到溶液為準，一般用量是 25ml，對于凝膠體積較大的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個銀染過程應(yīng)在搖床上進行，搖床轉(zhuǎn)速控制在 60～70rpm。提前配制固定液，即按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液，即按無水乙醇:去離子水=1:4 的比例配制。

2、水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗 2 次，每次 5min。

3、固定：取凝膠放入 50～100ml 固定液中，在搖床上室溫搖動 15～20min，重復(fù)固定步驟 1 次。

4、洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次，每次 5min。

5、水洗：去離子水清洗凝膠 2 次，每次 5min。

6、增敏：配制銀染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Sensitizer， 一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1×Silver StainSensitizer 孵育凝膠 2min，立即用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 1min。

7、銀染：配制銀染工作液，即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中，混勻，即得 1×Silver Stain，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。取凝膠入 1×Silver Stain，在搖床上室溫搖動 10～20min。

8、水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 30s，搖動速度在 60～70rpm?？偟乃磿r間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。

9、顯影：配制銀染顯影工作液，即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Developer，一般應(yīng) 30min 內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即置于 1×Silver Stain Developer 中，室溫孵育 2～10min，直至蛋白條帶清晰可見。一般顯色 30s 后就會出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影 2～3min，亦可延長至 5min 以上，如果顯影效果不佳，可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續(xù)顯影。

10、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上搖動 10min，以終止顯色反應(yīng)。 (配制銀染終止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml加入到 90ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Stop Buffer，一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。 )

11、保存：棄終止液，加入去離子水 50ml，搖床上搖動 2～5min，棄液。短期保存于新鮮去離子水，長期保存可以制備干膠。


注意事項 

1、由于銀染非常靈敏，操作時請注意盡量使用高純度的水，并確保所使用的器皿非常清潔，使用潔凈的玻璃器皿。操作時必須戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。

2、需自備乙醇、乙酸及MilliQ級純水或雙蒸水。

3、本說明書所指的室溫為20-25℃，操作溫度較低時由于溶液的擴散能力下降，各步驟需適當延長時間。

4、銀染基本顯色液(5X)在低溫環(huán)境下可能會出現(xiàn)少量沉淀，可在30-50℃水浴中溶解，并充分混勻后使用。至少后續(xù)稀釋至1X后須確保完全溶解。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題 

1、背景過深：①顯色時間過長；②洗滌不充分；③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈；④去離子水的純度過低。

2、蛋白條帶較淺：①蛋白的半胱氨酸含量過低；②銀染后水洗時間過長；③蛋白量較低；④固定后的洗滌時間不夠，導(dǎo)致乙酸殘留。

3、凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡：①凝膠沒有被充分浸沒，應(yīng)加入足量溶液；②容器沒有清洗干凈；③凝膠接觸金屬物質(zhì)；④指紋或其他壓跡。