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有效期：12個月
存儲 常溫運輸，陰涼避光保存，有效期12個月
革蘭氏染色法是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌細胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，乙醇脫色時，肽聚糖脫水使孔徑縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細胞膜上，呈紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，脫色后類脂外膜迅速溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物溶出，因此乙醇脫色后再經(jīng)番紅復(fù)染，呈紅色。
操作步驟：
1、標(biāo)本處理
（1）.有菌部位的標(biāo)本，如痰液、糞便、各種拭子、創(chuàng)面等可直接涂片。
（2）.無菌部位的標(biāo)本，如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關(guān)節(jié)液等，應(yīng)取適量標(biāo)本（最高可達5-7ml）,經(jīng)3000rpm 離心10min.，取沉渣涂片染色。
2、涂片制作
菌液涂片時，用接種環(huán)沾取菌液點在載玻片上，標(biāo)本可直接在玻片上涂布；菌落涂片時，先取生理鹽水一滴，置玻片上，用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。制作的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定的溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細菌形態(tài)改變。將固定后的涂片進行染色。
3、染色
一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是：
（1）加上結(jié)晶紫后，染色 1 分鐘，水洗。
（2）加上碘液后染色 1 分鐘，水洗。
（3）加上 95%酒精,搖動玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色約 20-60 秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃紅后，染色 1 分鐘，水洗。
（5）吸干或在空氣中涼干后，油鏡鏡檢。
注意：革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時間過長，或已死亡及部分菌體自行溶解，
都常呈陰性反應(yīng)。
4、結(jié)果觀察：革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以均勻分散開的細菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)，過于密集的細菌，常常呈現(xiàn)假陽性。
注意事項：
1．標(biāo)本涂片不能太厚，嚴(yán)格按操作要求進行。若涂片較厚，應(yīng)延長脫色時間，直至不再出現(xiàn)紫色為止。
2．玻片通過火焰溫度不能太高。
3．碘液變透明，則不能使用。
4．水洗時動作要輕柔,沿載玻片對角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體沖掉。
5. 涂片之前，應(yīng)事先在背面做好圓圈標(biāo)記，以便判斷后續(xù)試驗的位置。
Gram stain is probably one of the most commonly used staining procedures used in the field of microbiology. It is one of the differential stains that are used to characterize bacteria in one of two groups: either gram positive bacteria or gram negative bacteria.
Gram positive bacteria will typically have a stronger affinity for crystal violet on applying gram's iodine than the gram negative cell wall.
Being a mordant, gram's iodine forms a complex with crystal violet in the stain that has attached more tightly to the cell wall of gram positive bacteria than that of the gram negative bacteria.
Whereas the gram positive bacteria stain violet as a result of the presence of a thick peptidoglycan layer in the walls of their cell, the gram negative bacteria stain red, due to the thinner peptidoglycan layer in their cell wall (a thicker peptidoglycan layer allows for the retention of the stain, but a thinner layer does not).