Cy5 (Cyanine 5) 是一種發(fā)遠(yuǎn)紅(far-red)熒光的花青素?zé)晒馊玖?。它的消光系?shù)很高,熒光很亮,并且對pH不敏感,一般可以用633 nm或647 nm的激光束激發(fā)然后用 Cy5或APC濾片觀察,所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy5熒光落在遠(yuǎn)紅光區(qū),使用Cy5或者其它遠(yuǎn)紅光染料的一個(gè)重要優(yōu)勢是在這個(gè)長波長光譜范圍內(nèi)樣品背景熒光較低,而在這個(gè)區(qū)域CCD相機(jī)/檢測器檢測靈敏度最高。Cy5可以用來標(biāo)記蛋白,抗體,多肽,納米粒等,它最用于是標(biāo)記核酸分子(DNA和RNA)。
NHS活化酯(N-羥基琥珀酰亞胺酯,N-hydroxysuccinimide ester(NHS),succinimidyl ester(SE))是生物標(biāo)記反應(yīng)中最常用的活化基團(tuán)。它活化Cy5分子中的羧基,讓它可以和目標(biāo)生物分子上的胺基(主要伯胺)反應(yīng)生成穩(wěn)定的酰胺鍵,從而把Cy5分子標(biāo)記到生物大分子上。由于游離胺基是蛋白,抗體,多肽表面的常見官能團(tuán)(來自于賴胺酸側(cè)鏈),Cy5-NHS可以和它們直接反應(yīng)。核酸分子中天然不帶游離胺基,只有胺基修飾過的RNA或者DNA才可以和Cy5-NHS反應(yīng)。
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