5×蛋白上樣緩沖液(含DTT)產(chǎn)品簡介: 本產(chǎn)品適用于SDS-PAGE(SDS-變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)時(shí)作蛋白質(zhì)上樣用。其主要成份為SDS,DTT,溴酚藍(lán),緩沖鹽溶液等。SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷,這時(shí)蛋白質(zhì)本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu)上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關(guān)。溴酚藍(lán)用作電泳時(shí)的指示劑,可大概指示電泳結(jié)束的時(shí)間。 5×蛋白上樣緩沖液(含DTT)使用說明: 1、請按每40微升蛋白樣品加入10微升上樣緩沖液的比例(5倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 2、混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 3、冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 5×蛋白上樣緩沖液(含DTT)注意事項(xiàng): 1、聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時(shí)溴酚藍(lán)指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時(shí),約在20kd左右,膠濃度為15%時(shí),大概在10kd。請根據(jù)自己目標(biāo)條帶來判斷結(jié)果電泳時(shí)間。 2、本試劑因含DTT,有一定的毒性,為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 3、蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍(lán)指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態(tài)下,溶液可能會呈現(xiàn)深棕色,不影響產(chǎn)品使用。
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