Karnovsky固定液是組織化學(xué)中最常用的混合型固定液之一,主要成分含能快速滲透的多聚甲醛和緩慢滲透的戊二醛。它能很好保存組織的抗原性和精細結(jié)構(gòu),故尤其適用于電鏡免疫化學(xué)樣品的固定。本產(chǎn)品是在Karnovsky原始配方的基礎(chǔ)上修改而得,它具有下列特點:
1.既可用于灌注法固定,也可用于浸泡法固定。
2.滲透能力強,固定均勻,組織收縮小,染色效果好。
3.適用范圍廣,可以用于固定從細菌、真菌,植物到動物的各種生物材料。
4.對原始配方進行了改良,不使用有毒的含砷化合物,減少了對操作者的毒害。
5.固定的組織經(jīng)過包埋切片等處理用既可用于光學(xué)顯微鏡檢測,也可用于電子顯微鏡檢測。
操作步驟:
1.對動物,最后先灌注固定,然后再浸泡固定10-30分鐘。對植物、真菌、細菌、病毒、原蟲等材料,直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2.固定后的組織洗滌后即可用于包埋、切片、染色、檢測等后續(xù)操作。
Karnovsky固定液固定時的注意事項:
(1)固定液量:20倍于材料的體積,以免固定液被稀釋。
(2)選擇合適的固定液:滲透力強的固定液既可以迅速進入組織中,又不使組織過度收縮或膨脹。
(3)固定的時間要合適:
與材料的大小和溫度有關(guān):材料大則時間長,材料小則時間短;溫度高則時間短,溫度低則時間長。
經(jīng)固定的材料如不及時使用,可以經(jīng)過90%酒精換到70%酒精中各半小時,再換入一次70%酒精,在0-4℃冰箱內(nèi)可保存半年。經(jīng)過較長時間保存的材料進行觀察前可以換新的固定液再處理一次,效果較好。
Karnovsky固定液固定的條件:
(1)迅速滲入組織,殺死原生質(zhì)。在殺死的短時期中,細胞形態(tài)不致有所變化。
(2)必須具有滲透力,對組織各部分的滲透力相等,可使組織內(nèi)外完全固定。
(3)盡可能避免使組織膨脹或收縮。
(4)使細胞內(nèi)的成分凝固或沉淀。
(5)增加細胞內(nèi)含物的折光程度,易于鑒別。
(6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使組織變硬,具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生質(zhì)以后,增加細胞對于各種穿透的抵抗力,不致于因以后的處理而使固定的原生質(zhì)變形。
存儲與運輸:常溫運輸,2-8℃冷藏保存。
有效期12個月。
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