氮自由基（DPPH）清除能力測試試劑盒

(A001-96T 分光光度計法)

一.測定原理

DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，有一個單電子，在517nm下有強(qiáng)吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個電子使此單電子配對，其吸收會消失褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比。即反應(yīng)物清除氮自由基的能力與試劑在517nm的吸光值成反比。

二.試劑組成

試劑一：DPPH試劑1mL×1瓶

試劑二：100μg/mL 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液 20mL×1瓶

三.儲存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存6個月。

四.試劑的配制

試劑一：37℃平衡20min以上，待試劑融化后，在試劑瓶中加入100ml 95%乙醇或無水乙醇，劇烈震蕩使試劑充分溶解。

注意：溶解一定要充分，如有條件可采用超聲波助溶。

試劑二應(yīng)用液：根據(jù)是否需要制作陽性對照標(biāo)準(zhǔn)曲線有兩種配制方法。

1. 如僅需要將維生素C作為質(zhì)控品，可取100μL 試劑二，加入900μL樣品稀釋液，充分混勻；

2. 如需測定維生素C的IC₅₀，可分別移取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0mL 試劑二于空離心管中，再依次加入10.0，9.5，9.0，8.5，8，7.5，7.0，6.0，5.0ml樣品稀釋液，充分混勻。配制成0，5，10，15，20，25，30，40，50 μg/mL 維生素C樣品。

五.操作步驟

充分混勻，室溫避光靜置30min使之充分反應(yīng)。選用0.5mm比色皿³，517nm處測定吸光值。