??????BeyoAP Alkaline Phosphatase,即BeyoAP堿性磷酸酶,是一種熱敏感的,可以催化DNA、RNA、核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸水解釋放5′或3′末端磷酸基團(tuán)的酶,也可以脫去蛋白質(zhì)絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基上的磷酸基團(tuán)。BeyoAP Alkaline Phosphatase是一種新型堿性磷酸酯酶,在碧云天的各種內(nèi)切酶和PCR緩沖液中可保持100%活性,對(duì)于各種類型的DNA 5′末端的去磷酸化均可在37℃孵育10分鐘即可完成,并且75℃孵育5分鐘即可完全失活。 ??????堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被稱作堿性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1),是一類水解酶,通過(guò)水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去,并生成磷酸根離子和自由的羥基,其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質(zhì)和生物堿等,并在堿性條件下最為有效。該酶是一組同功酶的統(tǒng)稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被廣泛用于二抗等的標(biāo)記最終用于蛋白和核酸等的檢測(cè),也常用于DNA或RNA 5'和3'末端的去磷酸化(去單磷酸化),特別是質(zhì)粒的5'末端去磷酸化以避免質(zhì)粒自連等。 ??????經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切的質(zhì)粒5′端帶有磷酸基團(tuán),在進(jìn)行基因克隆時(shí)為避免質(zhì)粒自連,可以使用BeyoAP Alkaline Phosphatase去除5′末端磷酸基團(tuán)。脫去5′末端磷酸基團(tuán)的質(zhì)粒不能發(fā)生自連。 ??????特點(diǎn):快速去磷酸化,只需37℃孵育10分鐘即可;快速失活,75℃孵育5分鐘即可完全失活;使用方便,在各種內(nèi)切酶和PCR緩沖液中保持100%活性,可以和質(zhì)粒DNA的消化同時(shí)進(jìn)行;操作步驟簡(jiǎn)單,對(duì)于5′或3′突出末端、平端等各種DNA的脫磷酸化采用完全相同的操作步驟;可直接用于連接反應(yīng),經(jīng)BeyoAP Alkaline Phosphatase脫磷,并75℃孵育5分鐘失活后可直接用于后續(xù)的連接反應(yīng)。 ??????用途:通過(guò)去除載體或DNA片段5′末端的磷酸基團(tuán),防止載體或DNA片段自連;質(zhì)粒DNA的同時(shí)內(nèi)切酶消化和脫磷;通過(guò)5′末端脫磷,為5′末端磷酸化放射性標(biāo)記準(zhǔn)備模板;去除DNA、RNA 5′或3′末端的磷酸基團(tuán);用于蛋白質(zhì)絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的去磷酸化。 ??????來(lái)源:大腸桿菌表達(dá),表達(dá)基因?yàn)橐环N細(xì)菌堿性磷酸酯酶基因。 ??????酶活性定義:37℃10分鐘內(nèi),催化1μg 線性化的pUC19 DNA5′末端脫磷所需的酶量定義為一個(gè)活力單位。 ??????純度:不含DNA外切酶和內(nèi)切酶,不含RNA酶。 ??????酶儲(chǔ)存溶液:20mM HEPES-NaOH(pH7.4),1mM MgCl2,0.1mM ZnCl2,0.1% Triton X-100, 50%(v/v)glycerol。 ??????Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH8.0 at 37℃),50mM MgCl2,1M KCl,0.2% Triton X-100,10mM 2-mercaptoethanol,1mg/ml BSA。 ??????失活或抑制:75℃加熱5分鐘可以使BeyoAP Alkaline Phosphatase失活。金屬離子螯合劑對(duì)BeyoAP Alkaline Phosphatase有抑制作用。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存。 注意事項(xiàng):? ??????酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。?
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