??????碧云天的G6P檢測(cè)試劑盒(WST-8法) (G6P Assay Kit with WST-8)是一種高靈敏度的基于WST-8的顯色反應(yīng)，通過比色法來檢測(cè)細(xì)胞、組織或其它樣品中G6P含量的檢測(cè)試劑盒。
??????WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其他MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。WST-8和WST-1相比，檢測(cè)靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。
??????本試劑盒使用便捷。使用細(xì)胞、組織等的裂解液即可進(jìn)行檢測(cè)，無需分離純化細(xì)胞、組織或其它樣品中的G6P。
??????本試劑盒檢測(cè)靈敏度高，線性范圍寬。可以檢測(cè)含量低至20μM (1nmol)的G6P，在20μM (1nmol)至500μM (25nmol)之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
??????G6P (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱6-磷酸葡萄糖)是葡萄糖的第6位碳上的羥基在己糖激酶催化下發(fā)生磷酸化后生成的分子，是細(xì)胞中常見的糖代謝小分子，參與糖酵解(glycolytic pathway)和磷酸戊糖(pentose phosphate pathway)等生化途徑。在糖酵解的步反應(yīng)中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通過磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續(xù)糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其個(gè)底物，該過程也是生成NADPH的主要途徑。除了這兩個(gè)代謝途徑外，葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被存儲(chǔ)起來。
??????本試劑盒可檢測(cè)樣品中的G6P含量，具體原理如下：葡萄糖-6-磷酸(G6P)在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯(6-phosphogluconate, 6-PG)，在這一反應(yīng)過程中NADP+被還原為NADPH，生成的NADPH在電子耦合試劑1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下將WST-8還原生成橙黃色的formazan，在450nm左右有吸收峰。反應(yīng)體系中生成的formazan與樣品中總的G6P的量呈正比關(guān)系。WST-8法檢測(cè)G6P的原理參考圖1。

??????本試劑盒適用于檢測(cè)細(xì)胞、組織以及其它適當(dāng)樣品中G6P的含量。
??????本試劑盒可以測(cè)定100個(gè)樣品。

保存條件：
??????-20℃保存，一年有效。顯色液(S0185-3)須-20℃避光保存。
注意事項(xiàng)：
??????經(jīng)檢測(cè)本試劑盒中的酶混合液室溫存放72小時(shí)或反復(fù)凍融5次不影響其酶活性。
??????由于G6P提取液略顯粘稠，以該提取液作為稀釋液時(shí)，無論對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品還是樣品進(jìn)行稀釋，在稀釋過程中務(wù)必確保稀釋均勻，否則易造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生較大波動(dòng)。
??????在樣品加樣和混勻過程中，須盡量避免產(chǎn)生氣泡，以免影響最終的吸光度測(cè)定。
??????如果不能非常嚴(yán)格地控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間，每次檢測(cè)都需要設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線。
??????如果樣品溶液中G6P濃度過高或過低，不在試劑盒的線性檢測(cè)范圍內(nèi)時(shí)，可適當(dāng)調(diào)整樣品或者提取液的用量。
??????盡量使用新鮮樣品進(jìn)行檢測(cè)，凍存或反復(fù)凍融的細(xì)胞或組織樣品可能對(duì)結(jié)果有一定影響。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。