??????碧云天的Mouse IL-4 ELISA Kit (Mouse Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白細(xì)胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為4.5pg/ml，與人IL-4、IL-4 sR等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-4即白細(xì)胞介素-4(簡稱白介4)，又名B細(xì)胞刺激因子-1，其分子量大約在18-20kDa，在免疫應(yīng)答中具有多種效應(yīng)功能。成熟的小鼠IL-4是由140個(gè)氨基酸減掉20個(gè)氨基酸的信號肽所剩余的120個(gè)氨基酸組成。該細(xì)胞因子N端包含3個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)，能夠形成3個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，最終形成4-α螺旋結(jié)構(gòu)。成熟的小鼠IL-4分別與人IL-4和大鼠IL-4具有43%和63%的氨基酸同源性，三者之間并無交叉反應(yīng)性。Th2細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、NKT、γδT細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞均能夠分泌IL-4。
??????IL-4能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活，促進(jìn)小鼠B細(xì)胞表面免疫球蛋白的轉(zhuǎn)化，引發(fā)肥大細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的趨藥性，誘導(dǎo)CD4⁺細(xì)胞向Th2表型分化，還能促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖和活化。在腫瘤免疫中，IL-4也發(fā)揮了重要作用。在早起實(shí)驗(yàn)中研究者發(fā)現(xiàn)IL-4展現(xiàn)出了強(qiáng)大的抗腫瘤能力，這可能是由于IL-4具有抗血管生成能力和激活CD8⁺ T細(xì)胞的能力。然而，新的研究結(jié)果卻表明IL-4是一種腫瘤促進(jìn)分子，這一結(jié)果可能是因?yàn)樵贗L-4的作用下，腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗凋亡分子表達(dá)上升，同時(shí)IL-4作用于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，誘導(dǎo)組織蛋白酶的分泌，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生遷移。
??????IL-4首先與IL-4 Rα亞基結(jié)合，隨后該復(fù)合物與輔助受體鏈γ_c或IL-13 Rα結(jié)合。在JAK的作用下，受體C端發(fā)生磷酸化，隨后形成二聚體。這一過程導(dǎo)致STAT6被募集并發(fā)生磷酸化，磷酸化的STAT6發(fā)生構(gòu)象改變，形成二聚體，隨后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，對多種靶基因的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行調(diào)控激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠IL-4的濃度，其原理見圖1。小鼠IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠IL-4會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠IL-4抗體后，生物素化抗小鼠IL-4抗體與小鼠IL-4結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。小鼠IL-4濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。