??????碧云天的NADP+/NADPH檢測試劑盒(WST-8法) (NADP+/NADPH Assay Kit with WST-8)是一種基于WST-8的顯色反應,通過比色法來檢測細胞、組織或其它樣品中NADP+?(氧化型輔酶II)和NADPH?(還原型輔酶II)各自的量、比值和總量的檢測試劑盒。 ??????NADP+/NADPH以及NAD+/NADH的傳統檢測方法是檢測NADPH或者NADH在340nm處吸收波長的變化,該方法靈敏度較低并易受樣品中有類似紫外吸收物質的干擾,并且在紫外檢測過程中通常需要加大檢測樣品量以彌補NADPH在340nm處吸光度過小的不足,因此該檢測方法具有很大的局限性。 ??????WST-8是MTT的一種升級替代產品,和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先,MTT被一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶液來溶解;而WST-8和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定,使實驗結果更加穩(wěn)定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,線性范圍更寬,靈敏度更高。 ??????WST-8和WST-1相比,檢測靈敏度更高,更易溶解,并且更加穩(wěn)定。 ??????本試劑盒使用便捷,無需分離純化細胞、組織或其它樣品中的NADP+和NADPH,且特異性檢測NADP+和NADPH,而不檢測NAD+和NADH。本試劑盒可以檢測含量低至0.05μM?(2.5pmol)的NADP+或NADPH,在0.05μM?(2.5pmol)至6μM (300pmol)之間呈現良好的線性關系。 ??????NADP (Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)是很多氧化還原反應的輔酶,包括NADP+ (氧化型)和NADPH (還原型)兩種形式。NADP+也參與到生物合成反應中,比如脂質和核酸的合成。在動物細胞中,戊糖磷酸途徑(pentose phosphate pathway,PPP)的氧化階段是NADPH最主要的來源。 ??????本試劑盒可檢測樣品中的NADP+、NADPH以及它們的比值,具體原理如下:
??????本試劑盒適用于檢測細胞、組織以及其它適當樣品中的NADP+和NADPH各自的量、比值和總量。
保存條件: ??????-20℃保存,一年有效。顯色液(S0179-2)和NADPH?(S0179-3)須-20℃避光保存。NADPH配制成溶液后,須適當分裝后-80℃保存。所有試劑避免反復凍融。 注意事項: ??????本試劑盒中的所有試劑均需要冷凍保存,請嚴格按照保存條件進行保存。如果不是一次用完,為避免反復凍融導致產品失效,請適當分裝后保存。 ??????NADPH不太穩(wěn)定,取出NADPH后請盡快使用。如果發(fā)現標準曲線不理想,很有可能是標準品發(fā)生了降解。 ??????由于NADP+/NADPH提取液本身比較粘稠,以該提取液作為稀釋液時,無論對標準品還是樣品進行稀釋,在稀釋過程中務必保證稀釋均勻,否則易造成實驗數據產生較大波動。 ??????在樣品加樣和混勻過程中,須盡量避免產生氣泡,以免影響最終的吸光度測定。 ??????如果不能非常嚴格地控制反應溫度和反應時間,每次檢測都需要設置標準曲線。 ??????如果樣品溶液中NADP+和NADPH濃度過高或過低,不在試劑盒的線性檢測范圍內時,可適當調整樣品或者提取液的用量。 ??????由于NADP+和NADPH很不穩(wěn)定,在凍存過程中較易降解,所以宜盡量使用新鮮樣品進行檢測。 ??????本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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